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摘要：小麦赤霉病一般由链格孢菌属的真菌引起，典型代表为Alternaria tenuissima。本文以煎煮法煎煮郁金丁香复方，萃取、折中稀释得到1.0~0.03125 mg/mL不同浓度的ASE溶液，测定不同浓度的ASE溶液对极细链格孢菌（Alternaria tenuissima）、梨黑斑病原菌(Alternaria alternata)、红豆草黑斑病菌(Alternaria atternata)、柑桔链格孢(Alternaria citri)、白菜黑斑病菌（Alternaria brassicae）的抗菌活性以及对Alternaria tenuissima的生长影响；在活性筛选的基础上，对供试菌发酵液进行LC-MS分析，测定供试菌有毒物质链格孢酚的含量变化；通过对ASE进行热处理、酸碱处理和重金属处理，分离出抗菌活性成分，对菌进行生长抑制测试。结果表明：ASE溶液对五种链格孢菌均有明显抑制作用，其中对A. alternata的抑制率优于其他几种真菌；对A.tenuissima菌丝生长抑制不明显，但对其黑色素的生成有明显抑制效果；活性筛选后，供试菌产生有毒物质链格孢酚含量减少；分离出的抗菌成分对A. alternata的活性没有影响，因此，初步确定活性成分为小分子物质。37244
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毕业论文关键词：郁金丁香配伍、链格孢菌属、抑菌活性、LC-MS分析
Analysis of antifungal activity on FusaHum graminearum and active substances in the combination of turmeric and cloves
Abstract:Wheat gibberellic disease usually caused by Alternaria, the typical represention is Alternaria tenuissima. In this paper, dilute the extraction of cloves and Curcuma compound decoction to get different concentrations in 1.0 ~ 0.03125 mg / mL ASE, to determine different concentrations of ASE’s antifungal activity on the Alternaria tenuissima, Alternaria alternata, Alternaria atternata, Alternaria citri, Alternaria brassicae; On the basis of activity screening, we analysis the test fermentation liquid by LC-MS, for the change of altertoxins, a toxic substances, in tested fungus; Test A. alternata’s growth with antimicrobial active ingredient isolated from ASE by heat treatment, acid treatment and heavy metal treatment. Conclusion: Five kinds of Alternaria fungi were significantly inhibited by ASE, especially on A. alternata; After active screening test, fungus reduce the production of altertoxins; Antifungal ingredient which isolated from ASE has no effect on the activity of A. Alternata. Therefore, we initially identified active ingredient as the small molecules.
Key words: Curcuma, Cloves, compatibility, Alternaria, antibacterial activity, LC-MS analysis
目 录
前言 1
1 仪器、试剂与实验材料 3
1.1 主要仪器和设备 3
1.2 主要药品及试剂 4
1.3 实验材料 4
1.3.1 供试植物病原真菌 4
1.3.2 供试植物 4
2 实验方法与过程 4
2.1 中草药提取物的制备 4
2.2 对病原真菌菌丝生长的抑制活性测定 4
2.3 对Alternaria tenuissima产黑色素影响 4
2.4 对病原真菌毒素产生的抑制测定 5
2.5 ASE抑菌成分的确认 5
3 结果与分析 5
3.1 ASE对常见链格孢菌属真菌菌丝生长的抑制活性 5
3.2 ASE对A. tenuissima的产黑色素影响 5
3.3 ASE对链格孢菌属真菌毒素产生的抑制测定 6
3.4 ASE抑菌活性成分的分离 7
4 讨论与结论 7
致谢 8
参考文献 9
前言
Nature杂志2012年刊载的一份研究报告指出：由真菌引起的农作物粮食病害已成为全世界关注的粮食安全问题，这类病害在5大粮食农作物中的传播造成每年约1.25亿吨的损失，在这之中水稻、小麦和玉米的损失每年就高达600亿美元。学者推算，如果5大农作物粮食同一年同一时间被真菌病原菌侵害，就会造成全世界9亿吨的减产和使42亿人忍受饥饿，植物真菌病害的防治已经是目前全球范围刻不容缓的农业问题，也是重要的农业研究课题。在真菌病害中，链格孢属(Alternaria sp)病原菌由于寄主种类繁多、对生存环境和培养基质的适应能力强，不但是作为病原菌还是非常常见的腐生菌，可以引起玉米、小麦、烟草等田间农作物病害。根据美国农业部的统计，在2000种病害真菌中链格孢属真菌排第十位，属于严重危害农作物的病害真菌[1]。如美国甜瓜和西葫芦叶斑病由Alternaria cuemuerina引起，A. tenuissmia可以侵染大豆，造成大豆猝倒病，A. brassicicola可以引起卷心菜黑斑病，A. longipes引起烟草赤星病，还能引起苹果、梨等植物的病害，在农业上造成了极大的危害，给农民造成了巨大的损失[2-5]。在中国，链格孢菌导致大白菜感染黑斑病是一种常见的现象，严重地区侵害率甚至可以到达100%。A. solani是一种可以引起马铃薯早疫病的真菌，同时该病菌还能侵染花椒、茄子、龙葵、番茄等植物[6,7]。链格孢菌还能引起葡萄穗轴褐枯病、鸭梨黑斑病、杏果实黑斑病以及一些花卉病害[8-10]。链格孢菌还会导致种子萌发率降低、种苗活性减弱等，使农业生产发生巨大的经济损失。部分链格孢菌甚至能寄生在种子和果实中，在包装生产或储存、运送过程中继续侵害，分泌的毒素容易造成食品污染，威胁人体健康。在一些条件下，某些链格孢菌还可以成为人体的致病菌，能引起角膜发炎、鼻炎、呼吸道感染、手足疾病、甚至呕吐、肠胃出血等疾病[11-13]。