繁毒:包括4种大豆花叶病毒株系:SC3、SC7、SC15、SC18。
接毒:将脱毒种子在隔离网室内采用盆栽试验,在对生真叶期采用人工汁液摩擦法分别接种对应病毒株系。采集毒源病叶,加入金刚砂少许,将叶片研磨成匀浆状,加入磷酸缓冲液,用毛刷摩擦接种,接种后用清水冲洗叶片表面残渣[5]。
外源基因HC-pro的17个T4代高抗家系接种以上4种病毒(每个品种4个家系接种SMV株系,Jack品种1个家系,仅接种SC3)。
分类情况如下所示:
外源基因HC-pro的转基因材料:
1-76-18-9-4 1-40号(SC3)41-82号(SC7)
1-76-18-9-10 1-30号(SC15)31-65号(SC18)
3-11-20-1-2 1-19号(SC3)
3-11-20-2-18 1-25号(SC7)26-50号(SC15)51-74号(SC18)
6-45-9-1-1 1-25号(SC15)26-52号(SC18)
6-45-9-1-11 1-30号(SC3)31-62号(SC7)
82-10-9-10-7 1-40号(SC3)41-84号(SC7)
82-10-9-10-25 1-35号(SC15)36-68号(SC18)
CK-3-23-1-2 1-10号(SC3)
1.2 方法
1.2.1 除草剂涂抹
将商用Basta(除草剂)原液用纯水稀释至200 mg/l,加入0.1% Tween-20(表面活性剂)并搅拌均匀。用毛笔蘸取除草剂稀释液,以上表面主叶脉为分界线涂抹植株的半片叶子,另半片叶子作为对照并用记号笔标记。3-5 d后观察叶片症状,如果除草剂涂抹过的半片叶子与对照相比没有发生明显变化,判定为除草剂阳性;如果除草剂涂抹过的半片叶子出现黄化和枯萎等药害症状,判定为除草剂阴性。除草剂抗性幼苗的处理叶与对照无明显差异,而非转基因植株和转基因阴性植株的叶片均出现了明显的药害症状
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