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摘 要：本研究以番茄MT为试材，通过筛选无菌苗培养、苗龄选择和外植体、优化转化抽提时间和次数、分析预培养和复苏培养条件，进而构建番茄MT的新型遗传转化体系。番茄MT根、子叶、茎段和真叶等外植体经抽提后把叶片置于含有ZT与IAA的MS培养基上进行光照诱导再生成苗。番茄MT外植体于无菌条件下抽提1-3次，抽提时间分别为5、10和15min，抽提转化后于MS+1.2mg/L IAA+0.2mg/L ZT+100mg/L Kan培养基上诱导抗性芽。结果表明，番茄MT真叶经抽提3次，抽提时间为10min，转化效果最好。最终成功构建了番茄MT高效、稳定的新型遗传转化体系。31484
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毕业论文关键词：MT；遗传转化体系；外植体
Establishment of Novel Genetic Transformation System of Micro-TOM
Abstract: The Micro-TOM was taken as experimental material in this study, the novel genetic transformation system of Micro-TOM was established by screening aseptic seedlings culturation, different explants and seedling age, optimizing transformation time and number and analyzing of preincubation and resuscitaion culture condition. The root, cotyledon, stem and euphyllas of MT were made as the basic explants after extraction were transferred onto MS medium supplemented with Zt and IAA respectively for plant regeneration under light. The MT explants were extracted for 1-3 times and 5, 10, 15min, respectively, then were transferred onto MS+1.2mg/L IAA+0.2mg/L ZT+100mg/L Kan for inducing resistance plantlets. The results showed that, the transformation rate of euphylla was best with extraction for 3 times and 10min per time, and the novel genetic transformation system of MT was established.
Key words: Micro-TOM; Genetic transformation system; Explant
目 录
摘 要 1
引言 2
1. 材料与方法 2
1.1 材料 2
1.2 培养准备 2
1.2.1 无菌苗培养 2
1.2.2 渗透介质 3
1.2.3 再生培养基 3
1.3 方法 3
1.3.1 无菌苗获得 3
1.3.2 外植体选择 3
1.3.3 外植体的质粒转化与再生 3
1.3.4 番茄MT转基因的鉴定 4
2. 结果与分析 4
2.1 建立了Micro-TOM番茄高效再生体系 4
2.2 抽提转化法进行番茄MT转化 4
3. 讨论 5
3.1不同浓度的激素配比对番茄MT的再生影响 5
3.2抽提转化过程中抽提次数和抽提时间对番茄MT的转化效率影响 6
参考文献 7
致谢 9
番茄MT新型遗传体系的构建
引言
番茄（Solanum lycopersicum）为茄科茄属番茄亚属多年生草本植物，因其独特的口感和营养价值，早已成为重要的世界性果蔬经济作物之一。番茄是一个很好的遗传研究的茄科模式植物，具有丰富标记的多个遗传连锁图和物理图谱，其全基因组测序也已经完成和公布（http://solgenomics.net/）。番茄还具有很大的经济价值，是一种栽培最广泛的蔬菜作物之一。根据FAO的统计，2008年世界番茄生产面积达到523万公顷，占蔬菜（含瓜类）面积的9.7%；总产量已达1.29亿吨，约占世界蔬菜（含瓜类）总产量的14.2%。我国番茄栽培面积达到了145万公顷，约占世界番茄生产面积的27.8%。可见番茄在中国乃至世界蔬菜生产和供应中所具有的举足轻重的地位。番茄是典型的双子叶植物，它具有自花授粉、易杂交、繁殖系数特别高、遗传资源丰富、具有大量的EST序列和商业化的番茄芯片开发等特性，这些使番茄已经成为当之无愧的作为科研重要的模式经济作物。番茄MT（Micro-TOM）是番茄的一种突变体，它保留了普通番茄作为模式植物的基本特征，但植株矮小、生命周期短、具有节省研究空间、缩短研究时间的巨大优势。因此，番茄MT比普通番茄更适合应用于功能基因组学研究[1-4]。