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2.3 Micro RNA21与发卡核苷酸序列的设计与合成 12
2.4 发卡型金纳米分子信标的制备 12
2.4.1 发卡DNA的预处理 12
2.4.2 发卡DNA与金纳米粒子的偶联 13
2.4.3 盐化作用 13
2.4.4 封闭作用 13
2.4.5 紫外吸收及透射电镜表征 14
2.5 与靶分子杂交测定 14
3 结果与讨论 15
3.1 金纳米粒子的表征 15
3.1.1 紫外扫描吸收光谱表征 15
3.1.2 水动力尺寸测定 15
3.1.3 透射电子显微镜的表征 16
3.2 金纳米分子信标的表征 16
3.2.1 紫外扫描吸收光谱的表征 17
3.2.2 水动力尺寸的测定 17
3.2.3 透射电子显微镜的表征 18
3.3 靶分子micro RNA21的杂交实验 19
结论 20
致谢 21
参考文献22
1 引言
近两年来，国内外学者对小分子RNA（miRNA）的研究成为热点，miRNA作为一种内源性的、非编码的单链RNA分子，长度大约有18-26不同个数的核苷酸，起作用机理是通过与特异的靶mRNA互补配对对其进行降解或抑制其在体内的表达，在目前已发现的mi RNA中，mi RNA-21由于在众多疾病中都有表达异常，引起了医学界的高度重视[1]，所以，针对小RNA的检测手段的研究也引起了学者和科学家的关注，其中，最为人们所关注的检测技术当属分子信标技术。分子探针(molecular beacon，MB)是一种寡聚核苷酸的荧光探针，利用淬灭基团对荧光基团的荧光淬灭以及荧光复性进行靶分子的检测，具有高度的灵敏度和及其强的特异性，在生物学和医学等领域有着越来越重要的应用。
在此基础，提出了将分子探针应用于mi RNA-21的定量检测这一主要构想。
1.1 mi RNA-21的生物学概述
mi RNA-21作为miRNA的其中之一，经研究证实，其在人体中的表达水平对肿瘤的发展及预后有着很紧密的联系，在多种不同种类的癌症组织中，mi RNA-21表达的水平均有明显的上升[1]。接下来将从miRNA-21在基因中的位置、表达与调节机制以及检测等方面做出简要的阐述。
1.1.1 mi RNA-21的位置与表达
编码mi RNA-21的基因经研究发现位于17q23.2，也就是编码液泡膜蛋白的基因(vacuole membrane protein-1，VMP1）编码区，是其中的第十个内含子[2]。有学者经研究发现17q23.2基因编码区是与人体的癌症病毒易结合的区域，由此我们可以推测，mi RNA-21在癌组织的高表达可能与病毒的整合有紧密的联系[3]。
图1.1 miRNA-21在基因的位置
近来很多文献都有报道，mi RNA-21的表达水平在肿瘤细胞系相对较高，其中包括乳腺癌，宫颈癌，前列腺癌以及大肠癌等[4]。由此可见，miRNA-21是一个致癌性的小RNA。
1.1.2 mi RNA-21的调节机制
目前为止，虽然人们已经了解mi RNA-21的异常表达与肿瘤之间的联系，但是对于mi RNA-21的作用机制，可能是通过影响信号转导通路，也可能通过调控细胞凋亡相关的蛋白，我们还是尚未掌握，原因在于，微小RNA作用的靶基因至少有十个，还包括一些蛋白等生物因子[5]。但我们可以很好地利用mi RNA-21异常表达这一特性来对肿瘤进行诊断，这正是本次毕业设计的任务所在。
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