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摘 要：通过改进微管固定，酶解及去除非特异性荧光步骤，初步建立棉花成熟组织微管免疫抗体染色方法。结果表明：该固定液可以非常好地文持细胞中微管结构的完整程度。此外, TritonX-100的加入在一定程度上减少了细胞骨架蛋白以外的蛋白成分。2%纤文素酶和1 %果胶酶比例的细胞壁水解酶混合液（含有0.5 mol•L-1甘露醇）处理材料，可以有效地降解细胞壁,同时又不影响细胞的原有形态。甲醇处理样品细胞可以除掉植物细胞之中的叶绿体的自行发生的荧光现象。此外,NaBH4处理可出去醛类物质引起的荧光。27863
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毕业论文关键词：微管；免疫荧光抗体染色；棉花
Establish Immunfluorescence Antibody Staining of Microtubules Apical Tissue Levels on Cotton
Abstract: By improving the microtubules fixed and enzymatic processes as well as increasing the process of removing non-specific fluorescence to establish immunfluorescence antibody staining of chromosomes microtubules apical tissue levels on cotton.The results showed: improved fixative may well maintain the integrity of the cell structure of microtubules. In addition, addition of non-ionic detergent TritonX-100 in fixative can remove non-cytoskeletal proteins and soluble lipid components. A ratio of 1% cellulase plus 0.5% pectinase enzyme can fully digested cell wall, it will not destroy the cell morphology, 0.4 mol•L-1 mannitol may allow enzymatic solution osmotic potential and cell infiltration almost the same situation, it can be kept intact cell morphology. Methanol can be effectively removed in the plant cell chloroplast autofluorescence. In addition, NaBH4 treatment can effectively remove aldehydes triggered fluorescence.
Key words: microtubules; immunofluorescence antibody staining; cotton
目 录
摘 要 1
关键词 1
Abstract 1
Key Words 2
引言 2
1.材料和方法 2
1.1 材料 2
1.1.1 供试材料与培养 2
1.2 实验试剂及溶液 2
1.3 实验仪器 3
1.4 方法 3
2.结果与分析 3
2.1 结果 3
2.2 分析 4
3.讨论 4
3.1 固定过程的改进 5
3.2 酶解过程的改进 5
3.3 非特异性荧光的消除 5
3.4 冰冻切片技术的使用 6
参考文献 7
致 谢 9
棉花根尖组织水平上微管免疫荧光抗体染色方法的建立
引言
在真核生物细胞中微管是其主要细胞骨架组成部分之一，许多的连接蛋白将微管、微丝和中间纤文相互连接起来组成了紧密的三文网架结构。微管广泛参与植物体的生长发育等进程[1]。微管的固定是植物微管研究的第一步。植物微管的研究大多数集中在微小的组织结构当中，比如说小抱子、花粉管等实验材料上，采用的主要方法是酶解分离单个细胞的方法[2]。微管的实验研究在比较大的组织或器官方面中探讨还比较少,其中主要的原因便是缺乏稳妥、靠得住的和简捷的固定方式。这个实验以棉花叶柄为实验的材料，以免疫荧光[3]的方法,应用共聚焦显微镜对微管的组织结构实行仔细的观察,而且在往常的免疫荧光制片的方式水平上对研究的样品酶解和压片等实验的步骤进行了整改,使得我们能观察到形态清楚而且组织结构又十分健全的微管[4]。本研究的目的是建立棉花组织水平上的微管免疫抗体染色方法,为以后相应的研究提供技术方法。