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1.5研究意义及主要内容 4
2 实验部分 5
2.1 原料与试剂 5
2.2 实验设备 6
2.3 4-甲基伞形酮乙酯的合成 6
2.4 大豆乙酰酯酶酶活检测反应体系的建立 8
2.5 大豆乙酰酯酶的提取与纯化 9
2.8马拉硫磷降解菌的筛选 15
3结果与讨论 17
3.1 4-甲基伞形酮乙酯合成及荧光特性检测。 17
3.2 大豆酯酶的提取及酶活性分析 19
3.3马拉硫磷降解菌的筛选 26
结 论 27
致 谢 28
1 绪论
自20世纪 60年代以来, 有机氯杀虫剂开始被许多国家开始限制或禁止使用.而农用杀虫剂的使用对农作物的生产具有重要意义，有机磷农药具有药效高、品种多、防治范围广、成本低、选择作用高、药害小等特点,故其作为有机氯杀虫剂的替代农药迅速在国内外大量生产和使用。但是有机磷农药的残留也同样带来了十分严重的负面影响[1],因为农药残留不仅会改变土壤的原有的正常结构和功能[2, 3],还会降低土壤的正常生产能力。同时，有些农药会残留在蔬菜、水果、粮食中，他们通过食物链富集在动植物体内蓄积[4],严重时会导致机体正常的生理功能失调,进而引起病变[5]。同时有机磷农药残留问题也严重影响着我国的农产品的出口,我国每年因“绿色壁垒”而被退回的农产品可达数十亿美元。目前，随着人类对生活质量的要求不断提高和环保意识的逐渐增强,人们已经意识到有机磷农药的残留是个严重的问题,如何消除有机磷农药对环境和人类的危害,已成为关系人民健康和国民经济正常发展的重大科学问题。
1.1 马拉硫磷
马拉硫磷是一种有机磷杀虫剂,具有十分特殊的令人很不愉快的气,是无色油状液体,分子式为C10H19O6S2P, 分子量为330.35,熔点为2.8~3.7℃,沸点为120℃,密度为1.4985,在水中的溶解度为145mg/L。其结构式如图
马拉硫磷属于接触型杀虫剂,自1980全国推广防虫磷(马拉硫磷)以来,马拉硫磷乳油大量用于防治稻谷、玉米、小麦、大麦、高粱等原粮的仓储害虫,在控制农村储粮与种子虫害、提高国库综合防治能力、减少高毒熏蒸剂的使用等方面发挥了积极作用。直至现在,马拉硫磷和其混合剂仍是粮食储藏中使用较多的谷物保护剂之一。马拉硫磷对于玉米、小麦、高粱等其它禾本科农作物,特别是水稻的主要害虫中华稻蝗具有很好的触杀作用。还用于茶树、蔬菜、果树、水稻、小麦、棉花、豆类等作物的害虫防治,减少了农业生产中的损失。马拉硫磷还可以用于防治蔬菜黄条跳甲、蚜虫、林木蝗虫、果树蝽蟓、小麦黏虫、象甲、棉花盲蝽蟓、叶蝉、蓟马、豆类食心虫、蚜虫、造桥虫等多种害虫。
1.2农药的降解
1.2.1 微生物降解
微生物是农药转化的重要手段之一[6]， 近年来，随着微生物技术研究的深人发展，借用微生物降解农药在试剂应用中亦得到了长足的发展[7]。 许多科研工作者通过富集培养、分离筛选等技术已经发现了多种能够降解农药的微生物[8]。 已发现降解有机磷农药的微生物有施氏假单胞菌、嗜中温假单胞菌等假单胞菌属微生物，地衣芽抱杆菌、蜡状芽饱杆菌等芽抱杆菌属微生物，鲁氏酵母菌等真菌微生物;降解拟除虫菊醋类农药的主要是产碱菌属的微生物;降解有机氯农药的主要菌株有芽抱菌属、无色杆菌属和假单抱菌属〔 ’〕。目前对微生物降解农药的途径已比较清楚，其主要的降解途径主要有以下几种: