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7)加入等体积氯仿/异戊醇(24:1)混合液并补足至20ml,轻柔上下反复摇晃至溶液呈均一状态；
8)溶液在4℃下、9600rpm离心10 min后用移液枪吸取上清液到干净的50 ml无菌离心管中；此时如果仍有轻微白色浑浊，则再次重复步骤7）；
9)加入双倍的无水乙醇，小心反复倒置，在-20℃的条件下放置2h使其沉淀；
10)将50ml离心管在4℃下9600rpm离心10min；
11)将上清液倒出后加入5ml 70%乙醇，在4℃下9600rpm离心10min，再将上清液倒出；此步骤重复3次；
12)在常温中将离心管干燥，沉淀透明后倒入约300μL无菌水，溶解1小时后加
5μL的 10 mg/ml ribonuclease solution (RNase)于37℃温育30分钟