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摘要：褐飞虱（Nilaparvata lugens）种群繁衍速度极快，繁殖量大，对水稻生产危害极大，是我国及许多东北亚、东南亚等国家和地区的重要水稻害虫。表观遗传修饰可在基因的核苷酸序列不发生变化的情况下调控生物体多种生命活动，是重要的基因调控途径。本论文克隆了褐飞 虱N6AMT基因全长,发现了大量的长链非编码RNA基因，通过表达谱分析和RNA干扰等方法研究了其在褐飞虱生殖中的功能，论文成果对理解褐飞虱的表观遗传调控具有重要意义，同时为褐飞虱防治策略提出了新的思路。25199
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毕业论文关键词：褐飞虱；DNA甲基化；长链非编码RNA
Functional analysis of N6AMT and long non-coding RNA in Nilaparvata lugens reproductive development
Abstract： The brown planthopper (BPH), Nilaparvata lugens , a kind of monophagous insect, having a high reproductive rate. BPH is a significant rice pest in China and many countries and areas in Northeast Asia or Southeast Asia. Epigenetic modifications are indispensable and crucial in many biological processes without altering the genomic DNA and an important regulation mechanism. In this work, N6-adenine-specific DNA methyltransferase (N6AMT) were cloned by rapid amplification of cDNA ends (RACE). Thousands of long non-coding RNAs were identified in N. lugens. Their functions in BPH reproductive development were studied by expression analysis and RNA interference technique. This work present new insights into the epigenetic modifications of BPH, which could be exploited to develop novel pest control policy.
Key words: Nilaparvata lugens ; DNA methylation ；long non-coding RNA
目 录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
第一章 褐飞虱N6amt2的全长克隆与分析2
1材料与方法 2
1.1主要试剂和仪器设备 2
1.2供试昆虫的饲养2
1.3总RNA的提取 2
1.4 cDNA的合成4
1.5 PCR反应5
1.6分子克隆5
1.7蛋白结构域分析7
1.8多序列比对分析7
1.9基因结构分析7
2 结果与分析8
2.1获得基因片段与验证8
2.2 cDNA全长克隆9
2.3 褐飞虱N6amt2序列分析10
3讨论13
第二章 褐飞虱不同翅形及发育阶段中N6amt2的表达分析 14
1材料与方法14
1.1主要试剂和仪器设备14
1.2 供试昆虫的饲养14
1.3 总RNA的提取14
1.4 cDNA的合成15
1.5 引物设计16
1.6 荧光定量PCR反应16
2 结果与分析17
2.1 N6amt2在褐飞虱不同发育阶段的表达分析17
3 讨论18
第三章 褐飞虱N6amt2的干扰分析19
1 材料与方法19
1.1供试昆虫的饲养19
1.2主要试剂和仪器设备19
1.3 褐飞虱若虫的mimics注射19
1.4 干扰后目的基因表达量检测20
2 结果与分析20
2.1 干扰后N6amt2表达量分析20
2.2 N6amt2干扰后褐飞虱生殖力分析21
3 讨论22
第四章 褐飞虱长链非编码RNA的分析 23
1 材料与方法23
1.1 数据来源23
1.2 lncRNA预测及分析软件23
2 结果与分析23
2.1 lncRNA的发现23
2.2 lncRNA与褐飞虱生殖力的关系23
3 讨论24
参考文献25
致谢26
N6AMT基因和长链非编码RNA在褐飞虱生殖发育中的功能分析
第一章 褐飞虱N6amt2的全长克隆与分析
1材料与方法
1.1主要试剂和仪器设备
1.1.1主要试剂
Trizol试剂，Invitrogen公司提供；
SMARTerTM RACE cDNA Amplification Kit, Clontech公司提供；
SV Total RNA Isolation System Kit, Wizard. SV Gel and PCR Clean-Up System,Promega公司提供；
pGEM-T easy体，Promega公司提供；
PrimeScript RT Master Mix (Perfect Real Time)反转录酶、TaqDNA聚合酶、Markers,