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    为了开发有效的吸附材料,让生物催化剂在制备工业得以使用,开发高效的可再生的酶吸附固定材料迫在眉睫,因而研究资源丰富的天然物,特别是可再生的天然废弃物进行加工,制备固定化酶载体材料,将对充分利用自然资源、进行可持续发展具有十分重要的经济价值。

    在南方地区大量种植且是我国的主要水果之一—柚子(Citrus maxima)的可食率在46%—56%[9]。一般情况,柚子皮会未被利用而丢弃,一方面造成了浪费,另一方面污染环境,给社会带来了负面影响。如果这些柚子皮能被利用起来当作载体材料吸附剂,这对废物的再利用具有重要意义。

    本文以柚子皮为原料制备吸附剂材料,以中性蛋白酶为吸附质,考察吸附时间、吸附温度、吸附质初始浓度为影响因素的基础上,重点研究吸附酶对蛋白质水解性能,以确定柚子皮制备材料作为酶固定剂的可行性,这一研究旨在为柚子皮的科学利用提供参考据。

    2  实验部分

    2.1  化学药品和吸附材料

    表1. 化学药品

    药品名称 规格 生产厂家

    考马斯亮蓝G-250 AR 上海浩然生物技术有限公司

    乙醇 AR

    磷酸(85%) AR

    中性蛋白酶 AR 上海实意化学试剂有限公司

    牛血清蛋白 AR 国药集团化学试剂有限公司

    柚子皮吸附材料 AR

    2.2  仪器设备

    表2. 实验仪器

    仪器名称 生产单位

    水浴恒温振荡器 常州国华仪器有限公司

    UV751GD紫外可见分光光度计 上海欣益仪器仪表有限公司

    GZX—9146MBE数显鼓风干燥箱 上海博迅有限公司医疗设备厂

    精密试纸 上海三爱思试剂有限公司(原上海试剂厂)

    电子天平 北京赛多利斯仪器系统有限公司

    2.3  柚子皮吸附材料

    来源:本实验所使用的柚子皮吸附材料来自淮阴师范学院化学化工学院1006班沈茜茜和徐慧同学的实验成品。

    方法:将柚子内皮放入沸水中,煮沸,至相邻几次的水溶液颜色不变,抽滤,然后置于100℃烘箱中烘干24h得样品P1,将P1粉碎,随即筛分到粒径大小为500μm,置于干燥容器中储存备用。

    2.4  试剂配制

    准确称取50 mg考马斯亮蓝G-250,溶于25ml 90%的乙醇中、加入85%(W%)的磷酸50ml,最后用去离子水定容到500ml。此溶液在常温下可放置一个月。

    准确称取2.500g分析纯的中兴蛋白酶固体粉末,溶于250ml的容量瓶中,加去离子水至刻度线,摇匀,静置,得到0.010g/ml分析纯的中性蛋白酶溶液,使用时再按准确比例稀释成相应浓度的溶液。

    准确称取100mg牛血清蛋白,溶于100ml去离子水中,得到1000μg/ml的原液。

    除非另有说明,所有其他化学品都是分析纯的。

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