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摘要：目的：研究SHSY5Y细胞在GDNF的诱导下分化成多巴胺能神经细胞的可能性，并检测转化结果中多巴胺转运蛋白（DAT）及其含量变化。方法：采用Western Blot方法，检测DAT在SHSY5Y细胞中表达情况。结果：检测到DAT在SHSY5Y细胞分化后表达增加。结论：表示SHSY5Y细胞在GDNF的诱导下成功分化为多巴胺能神经细胞。40153
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毕业论文关键词：SHSY5Y细胞、多巴胺能神经细胞、帕金森病、多巴胺转运蛋白
The changes of DAT content in SHSY5Y cells after differentiation
Abstract: Objective: Study on the possibility that the SHSY5Y cells was induced by GDNF and differentiated into dopaminergic neural cells. The change in the content of DAT ( Dopamine transporte ) was detected. Methods: Using the Western Blot method to detect the expression of the DAT in the SHSY5Y cells. Result: The expression of the DAT increased in the SHSY5Y cells after differentiation. Conclusions: the SHSY5Y cells under the induction of GDNF successfully differentiated into dopaminergic neurons.
Keywords: SHSY5Y cells、Dopaminergic neurons、Parkinson’s disease、Dopamine transporte
前言
帕金森病(Parkinson’s disease，PD)由Parkinson(1817)首先以震颤麻痹的名称描述，是一种不能治愈的中枢神经系统慢性进行性退变疾病。是目前仅次于阿尔茨海默病的第二大中枢神经系统退行性疾病，其发病日趋严重[1-3]。对于帕金森氏病,由于至今仍无有效的根治方法[4]，所以多年来学者们提出多种帕金森病的病因学说，比如兴奋性神经毒性学说、多巴胺缺失学说等。但目前为止，仅有多巴胺缺失学说得到大多学者的认同。该学说认为帕金森病是因纹状体内缺乏多巴胺所致，其主要病变在黑质，PD患者因黑质有病变，多巴胺合成减少，使纹状体内多巴胺含量降低，因此多巴胺能神经功能减弱，胆碱能神经功能占优势，因而出现帕金森病的震颤、肌张力增高、动作迟缓等症状[5]。目前新的治疗思路为通过诱导其他细胞转化为多巴胺细胞，增加体内多巴胺的数量，达到治疗或辅助治疗PA的目的，如诱导SHSY5Y细胞等。
SHSY5Y细胞（人骨髓神经母细胞瘤细胞株）具有神经突样的细胞质突起，表达儿茶酚胺能神经元特有的TH(酪氨酸羟化酶)、多巴胺2B2羟化酶和DAT(多巴胺转运体)，该细胞系广泛运用于PD发病机制的研究[6]。
胶质细胞源性神经营养因子（glial cell line-derived neurotrophic factor，GDNF）于1993年由Lin等科学家从大鼠神经胶质细胞系B49的培养液中首先纯化并命名[7]。目前已经在多种神经细胞和神经相关细胞的培养过程中发现了GDNF的表达，它还有靶源性神经营养因子的作用[8,9]。
多巴胺( DA )，它是胆碱神经能细胞的前体物质，是下丘脑和脑垂体腺中的一种关键神经递质。中枢神经系统中DA的浓度受精神因素的影响[10]。从理论上讲，若增加这种物质，会使人兴奋，但是它会使人上瘾。
多巴胺转运蛋白( DAT )，位于中枢多巴胺能神经元末梢，是一种膜蛋白，属于 Na+／Cl-依赖性转运体基因家族，DAT现已成为调节多巴胺神经系统功能的重要环节[11]。
采用多种化学与生物实验方法，通过GDNF诱导SHSY5Y细胞，将其转化为DA细胞，从而增加脑内DA数量，以辅助治疗PD，因SHSY5Y细胞可表达出DAT，因此若在结果中检测到DAT含量的变化，即表示SHSY5Y细胞成功转化为DA细胞。
实验部分
1实验仪器与装置
垂直板电泳转移装置，SDS-PAGE电泳设备，高速离心机，吸水纸，高压锅，乳胶手套，多用脱色摇床，PVDF膜，-20℃低温冰箱，各种规格的吸头、离心管和移液枪，各种规格的烧杯、量筒等玻璃器材，搪瓷盘，保鲜膜，显影暗室，计时器，玻璃棒。