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2 . 实验方法
2．1有关试剂的配置
LB液体培养基（1L）：称量Tryptone 10.0g、Yeast Extract 5.0g、NaCl 5.0g，搅拌使其充分溶解，最后定容至1L，高压灭菌后室温保存。
PBS缓冲液（1L）：KH2PO4 0.24g，Na2HPO4 1.44g、NaCl 8.0g和KCl 0.2g加入去离子水中最终定容至1L。室温保存备用。
5× SDS-PAGE缓冲液：取Tris base 15.1g、Glycine（甘氨酸）94.0g、SDS 5.0g加入到去离子水中，充分搅拌溶解，最后加去离子水定容至1L。室温保存备用，用时稀释成1×。
转印缓冲液（1L）：取Tris 5.8g、Glycine（甘氨酸）4.9g、SDS0.37g加入到去离子水中，充分搅拌溶解，加去离子水定容至800mL后，加入200mL的甲醇，室温保存。
12%SDS-PAGE 分离胶（5mL）：双蒸水1.6mL、30%丙烯酰胺2.0mL、1.5M Tris-HCl 1.3mL、10%SDS 0.05mL、10%过硫酸铵0.05mL、TEMED 0.002mL。
SDS-PAGE浓缩胶（2mL）：双蒸水1.4mL、30%丙烯酰胺0.33mL、1.0M Tris-HCl 0.25mL、10%SDS 0.02mL、10%过硫酸铵0.02mL、TEMED 0.002mL。
5xSDS-PAGE Loading buffer(5mL)：250mM Tris-HCl、10%SDS、0.5%BPB、50%甘油、5%β-巯基乙醇（E2蛋白样本不加）
2．2质粒的构建
2．2．1引物的设计
根据GenBank公布的相应的基因序列，使用引物设计软件SnapGene设计相应的引物，送至南京市金斯瑞生物技术有限公司合成