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摘要：为了解产志贺毒素大肠杆菌O26（Shiga toxin-producing Escherichia coli O26, STEC O26）的菌株特征和生物学特性，检测STEC O26对不同药物的敏感性，我们从江苏某屠宰场采集了样品，对其中STEC O26进行了分离与鉴定。样品进行选择性培养增菌后，接种显色平板菌落形态，挑取可疑克隆，用PCR方法检测特异性基因和代表性毒力基因；用生化试验鉴定菌株生化特性；用玻板凝集试验鉴定菌株的血清型；用药敏试验鉴定菌株对不同药物的敏感性。分离出66株大肠杆菌，其中2株鉴定为STEC O26，并携带志贺毒素2。这两个分离株对不同药物的敏感性略有不同，但对头孢吡肟、氧氟沙星、头孢克洛、头孢唑啉和头孢曲松均敏感。33189
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毕业论文关键词：产志贺毒素大肠杆菌；O26血清型；分离鉴定；PCR
Isolation and identification of Escherichia coli O26
Abstract: In order to understand the characteristics and biological characteristics of Shiga Toxin Escherichia coli O26, and to identify the antimicrobial spectrum of STEC O26, samples were collected from a slaughterhouse in Jiangsu Province, and STEC O26 was isolated and identified. After selective culture of the samples, the chromosomes were inoculated with chromogenic colonies, picked suspicious pathogens, PCR was used to detect specific genes and representative virulence genes. Biochemical test was used to identify the biochemical characteristics of the strain. The serotype of the strain was identified by wave plate coagulation. The susceptibility of the strain to different drugs was identified by susceptibility test. The results showed that two isolates, STEC O26, were successfully isolated. The sensitivity of these two isolates to different drugs was slightly different, indicating that the isolates were two different strains. Both also showed sensitive drugs are: cefepime, ofloxacin, cefaclor, cefazolin, ceftriaxone.
Key words: Shiga toxin-producing Escherichia coli; O26 STEC; Isolation and identification; PCR
目 录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1 材料与方法2
1.1 材料 2
1.2 方法 2
1.2.1 STEC菌株分离 2
1.2.2 PCR及凝胶电泳实验2
1.2.3 血清型鉴定4
1.2.4 生化鉴定4
1.2.5 药敏试验4
2 结果与分析4
2.1 分离 4
2.2 PCR 4
2.2.1 O26基因扩增 4
2.2.2 主要毒力基因扩增5
2.2.3 O26基因酶切鉴定5
2.3血清型鉴定 6
2.4生化鉴定 6
2.5药敏谱分析 6
3 讨论 7
致谢8
参考文献8
大肠杆菌 O26 的分离与鉴定
产志贺毒素大肠杆菌（Shiga toxin-producing Escherichia coli，简称 STEC）是一类食源性致病菌，由于其携带了一种或两种志贺毒素基因，它有着很高的致病性，包括大肠杆菌 O26、O157、O45、O103、O104、O111、O121和O145等150多种其它血清型的大肠杆菌[1]。很多产志贺毒素大肠杆菌菌株可以引起人类腹泻、出血性结肠炎、溶血性尿毒综合征等，重者可导致死亡[2]。产志贺毒素大肠杆菌的致病性一方面来源于前噬菌体编码的志贺毒素，另一方面来源于紧密粘附素基因（如eae）、肠溶血素基因以及粘附基因（如stx）等[3-5]。产志贺毒素大肠杆菌为一种肠道致病菌，主要通过粪便进入食物链，经由牛羊等传播，感染动物的动物源性食品、水甚至直接接触都能感染人或动物。并且由于STEC的低感染剂量和高致病性，由其引起的爆发流行严重影响了食品安全[6-7]。
1983 年，Riley 报导了首例由大肠杆菌 O157 引起的出血性肠炎病例[8]，随后英国、加拿大、日本等多国相继出现流行爆发。近年来的研究表明，非 O157 STEC 对人类的致病性比 O157 还要高，尤其是 O26 等血清型[5]。我国第一次从人体内分离得到STEC O26是在2005年于河南省[9]。大肠杆菌 O26 的爆发不但传播范围广、传播速度快，还能够引起人类的多种相关疾病，对人类的健康是非常大的威胁。为了有效地防控高致病性的大肠杆菌 O26 的感染及降低其引发的疾病对公共卫生安全的影响，有必要对大肠杆菌 O26 血清型的细菌进行研究调查。但是产志贺毒素大肠杆菌的血清型众多，在研究和防控方面有着较大的困难，特别是在屠宰场到市场食品的这一流程中，现有的研究不多，本实验通过在这一流程中的取样，分离产志贺毒素大肠杆菌O26，分析其毒力基因、血清型、生化反应和药敏分析，来分析产志贺毒素大肠杆菌O26在我们的市场食品的生产线中存在的广泛性，在对 O26 的分离鉴定的过程中对这几种血清型的检测方法也有一定的参考意义。