DHG-9070A型电热恒温鼓风干燥箱 上海精宏实验设备有限公司
VS-840-1洁净工作台 上海博讯实业有限公司医疗设备厂
BSA224S电子天平 赛多利斯科学仪器(北京)有限公司
1.4培养基
LB培养基:蛋白胨10 g,酵母粉5 g,氯化钠10 g,水1000 mL,琼脂15 g。配好的培养基121℃灭菌20 min备用。
1.5试液
(1)3,5-二硝基水杨酸试剂:称取0.63 g 3,5-二硝基水杨酸并量取26.2 mL 2moL/L NaOH加到酒石酸钾纳的热溶液中(18.2 g酒石酸钾纳溶于50 mL水中),再加0.5 g结晶酚和0.5 g亚硫酸氢钠溶于其中,搅拌溶解后定容到100 mL贮于棕色瓶中。
(2 )1 mg/mL葡萄糖标准溶液:准确称取干燥恒重的葡萄糖10 mg,加少量蒸馏水溶解后,以蒸馏水定容至10 mL,即含葡萄糖为1.0 mg/mL。
(3)5C的丙烯酰胺储存液10 mL:用电子分析天平称取4.7 g的丙烯酰胺和0.25 g的甲叉双丙烯酰胺,放置于玻璃瓶中,用重蒸水溶解,配成10 mL 49.5%的储存液。
(4)10%的APS溶液:用电子分析天平称取0.06 g的过硫酸铵,用600 mL的蒸馏水溶解混匀。
(5)正极缓冲液:4.846 g Tris溶于16 mL去离子水中,用1.0M HCL调至pH8.9,定容至200 mL。
(6)负极缓冲液:将2.422 g Tris,3.5832 g Tricine及0.2 g SDS溶于16 mL去离子水中,加水至终体积为200 mL。
(7)尿素胶:在电子分析天平中称取2 g的尿素放在10 mL的小烧杯中,用移液枪按顺序抽取2 mL 的5C储存液,1.5 mL的 pH8.8的缓冲液,60 μL的10%SDS,800 μL的蒸馏水,溶解。继续加入20 μL的10%的APS以及2 μL的TEMED来!自~751论-文|网www.751com.cn
(8)浓缩胶:用移液枪按顺序吸取水1.4 mL,30%的丙烯酰胺0.33 mL,pH为6.8的Tris 0.25 mL,10%的SDS 0.02 mL,10%的APS 0.02 mL以及TEMED 2 μL于小烧杯中,
(9)染色液 称取0.2 g的R250,加入84 mL和20 mL的冰醋酸,并用去离子水定容至200 mL,混匀,过滤备用。
(10)脱色液 用量筒量取70 mL的95%的乙醇,10 mL的冰醋酸以及120 mL的去离子水于试剂瓶中,混匀。