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    色谱法分离原则是溶解在流动相的组件通过固定相,由于固定相的大小起到一定作用,又称为色层法。高效液相色谱法[5]迅速发展,高灵敏度、选择性、快速测定、分析时间短、样品处理简单、可重复的测量结果等等。该方法是测定维生素C较好的方法。

    2,4-二硝基苯肼法用活性炭将样品脱氢,再与2,4-二硝基苯肼作用,然后放在冰水中加入硫酸后,用分光光度法测定,得出吸光度,再通过标准曲线和计算公式得出维生素C含量。这个方法测定总的抗坏血酸。

    还有也可以用碘量法[6]测定维生素C。和2,6-二氯酚靛酚的原理有异同点,相同的是都是通过颜色的变化来决定滴定终点。当溶液呈现了蓝色,就可以记录下实验数据。电位滴定法滴定分析来解决遇到的问题,有色或浑浊的解决方案。还有原子吸收法[7]。

    库仑滴定法是通过指标或电位确定端点方法。这种方法不需要我们去配置标准化的试剂的解决方案,消除了我们需要准备大量的参考资料。

    2 材料与方法

    2.1 2,6-二氯酚靛酚滴定法

    2.1.1 实验原理

    在2,6-二氯酚靛酚滴定法中,利用维生素C氧化还原反应的原理测定维生素C含量[8]。在一般情况下,在没有任何干扰的情况下,滴定步骤中测定的量多,样品中含有的维生素C的量就多,具有成正比的关系[9]。这个方法的优点很多能测定不同类型的样品。但是价格昂贵,不能直接测定样品中维生素C含量,通过测定滴定的量通过公式间接得出维生素含量,但是实验容易受到外界的干扰。而大多数水果及其研磨制品有颜色,也会影响最终的准确性。

    2.1.2 实验试剂与器材 

    试剂:2%草酸,2,6-二氯酚靛酚溶液,猕猴桃,橙子[10],橘子,柠檬,番茄,黄瓜,香蕉,苹果,梨,1%草酸,标准抗坏血酸溶液(1mg/mL)

    器材:研钵;吸量管(10mL);容量瓶(50mL);锥形瓶(50mL);微量滴定管(5mL);纱布;三角瓶。

    2,6-二氯酚靛酚溶液:称取50mg二氯酚靛酚于200mL含有52mg碳酸氢钠的热水中,冷却后稀释至250mL。然后过滤,装于棕色瓶中,放入冰箱中保存。使用时用维生素C标准液标定其浓度。

    2%草酸溶液的配制:用药物天平称取2g草酸,溶于1000mL蒸馏水中。文献综述

    2.1.3 实验方法

    制备含维生素C的样品提取液:称取样品5g置于研钵中,加入2%草酸30mL,进行研磨,然后待研磨均匀后用4层纱布过滤,最后用2%草酸定容至50mL,混匀,备用。

    标准VC的测定:取6支50mL三角瓶,标序。在第一、二支三角瓶中都加入1mL标准抗坏血酸溶液和9mL 1%草酸溶液,在第三支三角瓶中加入10mL 1%草酸溶液,在第四支三角瓶中都加入8mL样品溶液,在第五支三角瓶中都加入8mL样品溶液,在第六只三角瓶中加入10mL 2%草酸溶液。然后用微量滴定管对每一个三角瓶进行滴定,把2,6一二氯酚靛酚溶液滴入三角瓶中,当三角瓶中的溶液变成淡玫瑰色,这时我们要特别小心,慢慢的一滴一滴的滴入,直到红色不能立即消失,持续5秒钟以上颜色不变化为终点,我们需要在表格中记录下所用2,6一二氯酚靛酚的mL数。整个滴定过程不要超过2分钟,防止放坏血酸被氧化[11]。

    A(每克样品中VC)=( ﹣V0)×T/W

     :滴定样品提取液所用的2,6-二氯酚靛酚的平均mL数;V0:滴定空白对照所用的2,6-二氯酚靛酚的平均mL数;T:1mL2,6-二氯酚靛酚相当于VC的mg数;W:称取的样品质量。

    2.2 2,4-二硝基苯肼法

    2.2.1 实验原理

    维生素C又称抗坏血酸,生物体内的抗坏血酸主要包括还原型和脱氢型两种[12]。生物样品中的抗坏血酸以还原型为主。2,4-二硝基苯肼法用活性炭将样品脱氢,再与2,4-二硝基苯肼作用,然后放在冰水中加入硫酸后,用分光光度法测定,得出吸光度,再通过标准曲线和计算公式得出维生素C含量。这个方法测定总的抗坏血酸。

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