乙酰胺:在100 mL的0.1 M磷酸缓冲液(pH6.0)中加入1.475 g乙酰胺,过滤除菌;
Ni Sepharose 6 Fast Flow 结合缓冲剂(Binding buffer):
10.0 mM 咪唑,溶于100.0 mM pH 7.0磷酸缓冲液中;
Ni Sepharose 6 Fast Flow 洗涤缓冲液(Washing buffer):
20.0 mM 咪唑,溶于100.0mM pH 7.0磷酸缓冲液中;
Ni Sepharose 6 Fast Flow 洗脱缓冲液(Washing buffer):
250.0 mM 咪唑,溶于100.0 mM pH 7.0磷酸缓冲液中;
SDS-PAGE电泳试剂:
30.0 % 分离胶贮液:29.2 % 丙烯酰胺,0.8 % N’N’-亚甲基双丙烯酰胺,过滤后棕色瓶4 ºC保藏(储存不超过2周)。
分离胶缓冲液:1.5 M Tris-HCl pH 8.8,过滤后4 ºC保存。
浓缩胶缓冲液:1.0 M Tris-HCl pH6.8,过滤后4 ºC保存
电极缓冲液: Tris-Base 3.0 g,甘氨酸14.4 g,SDS 1.0 g,双蒸水定容至1000.0 mL,室温保存。
样品缓冲液:SDS 0.5 g,50%甘油5 mL,巯基乙醇0.25 mL, 1%溴酚蓝2.0 mL,浓缩胶缓冲液2.5 mL,定容至50 .0 mL。
考马斯亮蓝R-250染色液:0.1 g考马斯亮蓝R-250,置于1.0 L烧杯中,加入250.0 mL异丙醇,搅拌溶解,加入100.0 mL冰醋酸,搅拌均匀,加入650.0 mL去离子水,搅拌均匀,用滤纸过滤除去颗粒物质,室温保存。来`自^751论*文-网www.751com.cn
考马斯亮蓝染色脱色液:100.0 mL冰醋酸、50.0 mL乙醇、850.0 mL蒸馏水混合均匀后使用。
缓冲液:0.1 M 醋酸钠缓冲(pH 4.0-5.5),0.1 M 磷酸缓冲液(pH 6.0-8.0),0.1 M甘氨酸-氢氧化钠缓冲液(pH 8.5-9.0)。
2.3 外切葡聚糖酶组分的分离纯化
2.3.1 外切葡聚糖酶发酵液浓缩
重组马克斯克鲁维酵母产外切葡聚糖酶发酵液4 ℃,8000 rpm离心,弃菌体,上清液通过透析法浓缩。
2.3.2 透析法浓缩11
将离心上清发酵液将在透析袋中,放在干净的保鲜袋上,并在透析袋四周撒上变色硅胶,最后浓缩至3.0 mL左右。整个过程在4 ℃或0 ℃下进行