表2-1测定SOD活性所需各溶液的用量
试管编号 1对照(不光照) 2对照(光照) 3 4
PBS(mL pH7.8) 3.5 3.5 3.5 3.5
氮蓝四唑(mL) 0.5 0.5 0.5 0.5
甲硫氨酸(mL) 0.5 0.5 0.5 0.5
蒸馏水(mL) 0.5 0.5 0.3 0.3
EDTA-Na2(mL) 0.5 0.5 0.5 0.5
酶液(mL) 0 0 0.2 0.2
核黄素(mL) 0.5 0.5 0.5 0.5
测定结果 0 调零
2.3.4 过氧化物酶(POD)活性的测定方法
POD活性的测定采用愈创木酚法测定[7],以每克鲜重每分钟OD470值变化(上升)0.01表示酶活性大小,单位为U/g.minFW。
方法如下:
(1)制备反应混合液:取100ml PBS(0.2M,pH6.0)加入0.076ml愈创木酚(原液),加热搅拌溶解,冷却后加入0.056ml 30%H2O2,摇匀后冷藏备用。
(2)活性测定:取1cm光程比色皿2支,一支加入2.5ml反应混合液和30μl酶液,另一支加2.5ml反应混合液和30μlPBS(不加酶液)为对照调零,而后立即测定OD470值,每隔1min记录1次吸光度值,共记录5次。然后以每分钟内OD470变化(上升)0.01为1个酶活性单位(U)。来!自~751论-文|网www.751com.cn
(3)测定完成后根据公式计算结果:
(1-4)
2.3.5 过氧化氢酶(CAT)活性的测定方法
CAT活性的测定采用H2O2紫外分解法测定[8],以每分钟OD240值(下降)0.01表示酶活性大小,结果以U/g.minFW表示。方法如下:
(1)取10ml试管4支,其中1支作为调零,1支为对照管,2支为样品测定管。按表2-2加入各试剂。
(2)S0号管在沸水浴中煮1min使酶液失活,冷却。再将所有试管预热至25℃后,然后逐管加入0.6ml 0.1mol/L的H2O2。每加完1管立即记时,并迅速倒入1cm光程比色皿中,测定OD240,每隔1min读数1次,共记录5次。