已有研究表明[ 18],在生育前期,植物体内叶绿体在低温胁迫下受到的破坏以及叶绿素合成受到的阻碍将在满足正常生长条件后可以得到恢复。而在生育后期,植物在低温胁迫下叶绿素的降低得不到补偿。低温胁迫下叶绿素含量减少的原因很多,有研究表明低温下叶绿素含量的下降,可能是由于低温限制了叶绿素的合成而不是引起叶绿素的破坏。
1.3 低温对丙二醛含量的影响
丙二醛产生量是鉴别逆境胁迫对生物膜危害程度的一个重要指标。丙二醛是膜脂过氧化的最终产物,直接影响膜上结合酶的活性及数量,大量的MDA积累使细胞代谢紊乱,失去正常的调节功能,从而对细胞产生毒害作用。已有研究表明,在逆境下植物细胞内的抗性的保持与自由基平衡体系的维持息息相关。而MDA是膜脂过氧化的最终产物,能够使细胞保护酶活性降低和抗氧化物的含量减少, 从而加剧膜脂过氧化。MDA 本身对细胞有毒害作用,与酶结合交联而使酶失活, 从而更加破坏膜结构[ 1]。
1.4 低温对可溶性糖含量的影响
已有研究表明,可溶性糖作为渗透保护物质,可提高细胞液的浓度使细胞质的冰点降低,从而提高植物的耐冷能力。戴玉池等[ 19]研究发现,耐寒性较强的水稻品种在低温胁迫下,淀粉水解较不耐冷品种的淀粉水解旺盛,葡萄糖、蔗糖等可溶性糖含量有所增加。可溶性糖含量的增加提高了细胞液的浓度,降低冰点,进而缓解由冰冻引起的细胞脱水现象,进而防止细胞质胶体遇冷凝固。文献综述
1.5 低温诱导的氧化胁迫
自由基学说[ 20] 认为, 在正常情况下,植物细胞中活性氧的产生和消除是处于动态平衡过程中。当植物受到逆境胁迫会促进植物体内活性氧产生,对膜系统造成伤害,从而损伤植物[ 21]。膜脂过氧化作用的中间产物自由基和最终产物丙二醛( MDA) 都会对水稻的生物膜产生严重伤害。通过膜脂过氧化作用和膜蛋白( 包括酶分子) 链式聚合作用等,自由基会使细胞膜系统发生变性。但通常情况下,由于植株体内有一套高效保护酶系统可以清除产生的活性氧自由基,所以可以减少植体内因活性氧产而生的伤害。水稻也具有抗氧化系统即保护酶系统,指一些具有清除活性氧自由基功能的酶, 防止自由基对植物造成毒害。如过氧化物酶( POD)、过氧化氢酶( CAT )、超氧化物歧化酶( SOD) 及抗坏血酸氧化酶( ASP) 等[ 22] 。SOD是一种含金属的酶,主要功能是清除体内过多的超氧自由基,从而调节体内的氧化代谢和抗衰老功能,超氧自由基是强氧化性物质和致衰老因子。SOD 几乎分布于水稻的各组织中,如叶绿体、线粒体和细胞质中均有SOD[ 23-24]。CAT在水稻体内主要功能是分解H2O2, 减少其在细胞中的含量,防止因过氧化反应产生的自由基而对细胞造成的伤害,功能较专一,在所有组织中几乎都有分布, 其活性与代谢强度与抗寒能力有一定的关系[25]。而水稻体内的POD主要功能是催化H2O2 分解, 将其底物所产生的过氧化物氧化,其功能较复杂且种类较多[26-27]。在水稻体内H2O2 通过CAT和POD 分解,而O2-通过SOD歧化分解, 所以维持自由基处于一个较低的水平是通过SOD, POD 和CAT 协同作用的,提高水稻抗寒力。
2 材料与方法
2.1 实验材料
实验材料为野生型(P2)、突变型(1314)的两种水稻,其中,1314剔除了抗冷基因ICE1。本文将用P2、1314分别代表野生型和突变型。
2.2 处理方法来.自/751论|文-网www.751com.cn/
挑选颗粒饱满、大小一致的种子,用水洗净后,用水浸泡,然后在30-35℃温箱中(黑暗)保温催芽,挑出露白一致的种子播于纱网上,用盛有清水的塑料箱培养,放在PRX-600B型智能人工气候箱中(温度为28℃,昼夜分别14h/10h,白天光照为high,夜晚光照为0,湿度为70%),每2d更换一次清水。催芽4-6d后,将长至1叶1心的幼苗,换用3L 的1/2 Hoagland营养液进行培养。待幼苗长至3叶1心时,进行低温处理,将实验材料分为两组, 一组于原培养箱中继续生长,另一组移至8℃低温气候箱进行低温胁迫处理,分别于低温处理前、低温处理4d后、8d后取材, 测定相关指标。每个处理约120株苗,每个处理3个重复,每2d更换一次培养液。