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摘要本课题尝试从实验室已筛选得到的代谢R-扁桃酸的菌种中提取R-扁桃酸脱氢酶。改变培养时间，采用不同破碎方法，在各个pH条件下，分别检测其破碎细胞提取液中R-扁桃酸脱氢酶。R-扁桃酸脱氢酶一直未检测到，却偶然在菌种H2发现NADH氧化酶，且活性很高。该菌产NADH氧化酶不受扁桃酸的影响。将该菌种接入LB培养基中在37℃下培养18h，离心集菌，采用超声波破碎、40%硫酸铵沉淀、DEAE-Sepharose离子交换层级等步骤，从细菌中分离纯化得到NADH氧化酶。测得酶的最适pH值为7.0，最适反应温度40℃，并测试了酶的pH稳定性。.64756
毕业论文关键词 NADH氧化酶 分离 纯化
Title Screening of the strain metabolizing
R-mandelic acid
Abstract
This subject attempted to extract R-mandelic acid dehydrogenase from the strain screened by laboratory could metabolize R-mandelic acid. Changing the culture time, the type of crushing method and the pH value of the buffer, were used to detect its R-mandelic acid dehydrogenase activity in the cell extract. R-mandelic acid dehydrogenase has not been detected, but occasionally found NADH oxidase in strain H2, and the activity was high. Strain to produce NADH oxidase, this process was not of mandelic acid. This strain was cultured 18h at 37 ℃ in LB medium, centrifuged set of bacteria, the use of ultrasonic disintegration, 40% ammonium sulfate precipitation, DEAE-Sepharose, isolated and purified NADH oxidase from the bacteria. The optimum pH of the enzyme was measured 7.0 and the optimum reaction temperature 40 ℃, and test the pH stability of the enzyme.
Keywords NADH oxidase separation purification
毕业设计说明书（论文）外文摘要
目 次
1 绪论 1
1.1 R-扁桃酸简介 1
1.2 R-扁桃酸脱氢酶简介 1
1.3 NADH氧化酶的分类和来源 2
1.4 NADH氧化酶的理化性质 3
1.5 NADH氧化酶的生理功能 4
1.6 研究意义与检测方法 4
1.7 研究工作主要内容 5
2 实验内容与方法 6
2.1 实验材料与仪器 6
2.2 实验方法与步骤 8
3 实验结果与分析 12
3.1 R-扁桃酸脱氢酶检测 12
3.2 NADH氧化酶的分离提纯 13
3.3 NADH氧化酶性质测定 17
结 论 19
致 谢 20
参考文献 21
1 绪论
1.1 R-扁桃酸简介
扁桃酸（Mandelic acid），又称苯乙醇酸或苦杏仁酸，其学名为α-羟基苯乙酸。扁桃酸有一个手性碳原子，因而有R型和S型两个对映体。R-扁桃酸在 160℃逐渐外消旋化。
R-扁桃酸和它的衍生物是合成血管扩张剂、杀菌剂等药品的重要中间体，多种药物的合成都涉及到它。R-扁桃酸可以作不对称合成中间体和外消旋拆分剂[1]，还可以用来制成手性溶剂[2]。目前，外消旋扁桃酸的制备工艺已经基本完善，而高纯度的R-扁桃酸或其衍生物的合成工艺仍在发展中。药物的立体化学特征会影响药物的效果，有的甚至会产生毒性。如果可以获得光学纯的R-扁桃酸，不仅能够大幅度的提高药效，而且会使副作用显著下降。因此，合成光学纯的R-扁桃酸得到了业界广泛的关注[3]。