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加入显色剂20min后、2h以内，在540nm的最大吸光度波长处，用光程长10mm的比色皿，以实验用水做参比，测量溶液吸光度。
C）空白实验
按上述步骤进行空白实验，用50ml水代替试份。
1.6.3硝酸盐氮的测定——紫外分光光度法
a)方法原理
利用硝酸根离子在220nm波长处的吸收而定量测定硝酸盐氮。溶解的有机物在220nm处也会有吸收，而硝酸根离子在275nm处没有吸收。因此，在275nm处作另一次测量，以校正硝酸盐氮值。
b）操作步骤
收集50mL于比色管中,加1.0mL盐酸溶液0.1mL氨基磺酸溶液于比色管中(如亚硝酸盐氮低于0.1mg/L时,可不加氨基磺酸溶液)用光程长10mm石英比色皿，在 220和275nm波长处，以经过树脂吸附的新鲜去离子水50mL加1mL盐酸溶液为参比,测量吸光度。
2实验内容与方法
2.1实验材料与仪器
2.1.1实验菌种
菌种：TP,E.coli DH5α
基础盐培养基(g/L):NH4Cl 1.0,FeSO4 0.01,K2HPO4 0.5,NaCl 0.5,MgSO4 0.5,蒸馏水1000mL,葡萄糖 20g,115℃灭菌15min备用。
表2-1实验药品
名称 规格或型号 生产厂家
KH2PO4 分析纯 南京化学试剂有限公司
盐酸 分析纯 南京化学试剂有限公司
NaCl 分析纯 南京宁试化学试剂有限公司
NH4Cl 分析纯 南京宁试化学试剂有限公司
硫酸镁 分析纯 成都市科龙化工化工试剂厂
葡萄糖 分析纯 南京化学试剂有限公司
纳氏试剂 分析纯 实验室自制
酒石酸钾钠 分析纯 南京化学试剂有限公司
硫酸亚铁 分析纯 成都市科龙化工化工试剂厂
牛肉膏 分析纯 南京宁试化学试剂有限公司
蛋白胨 分析纯 南京宁试化学试剂有限公司
琥珀酸钠 分析纯 南京宁试化学试剂有限公司
表2-2实验仪器
名称 规格或型号 生产厂家
微量高速离心机 TG16-W 湖南湘仪实验室仪器开发有限公司
可见分光光度计 VIS-7220 北京瑞利分析仪器有限公司
紫外可见分光光度计 CARY 100conc 上海医用核子仪器厂
pH计 PHS-25 上海精密科学仪器有限公司
全温度振荡培养箱 HZQ—F100 江苏省太仓市华美生化仪器厂
电子天平 BS 224 S 北京赛多利斯仪器系统有限公司
2.2实验方法及步骤
2.2.1培养方法
细菌培养: 从新鲜斜面上取一单菌落,接种至装有100mL培养基的300mL 锥形瓶中培养, 培养温度为30℃,150r/ min 摇床震荡培养。每两天补加1g葡萄糖，避免细菌结团。
2.2.2测定方法
每两天取样一次，1000r/min离心5min，取上清液测定氨氮、亚硝酸盐、硝酸盐浓度。如果不当时测量，放入 4℃冰箱保存。
a) 氨氮测定方法
取试样125μL加入到50mL比色管中，用去离子水标定至标线，加入1mL酒石酸钾钠溶液，摇匀，再加入1mL纳氏试剂，摇匀，放置10min后，在波长420nm下，用20mm比色皿，以水作参比，测量吸光度。
b) 亚硝酸盐测定方法
取2.5mL试样加入到25mL比色管中，用去离子水标定至标线，加入显色剂(3.5)1.0mL 密塞，摇匀，静置，此时pH值应为1.8± 0.3。