里氏木霉是一种嗜热丝状腐生真菌,是多细胞的真核微生物,隶属于丛梗孢目木霉属。作为工业菌株用于生产分解不同植物材料的酶类。被广泛应用于生产食品、饲料、纺织、制浆和造纸等行业用纤维素和半纤维素酶。里氏木霉的菌落呈广铺的棉絮状,起初为白色致密的平坦菌丝,而后边缘出现浅绿的产孢子丛束区,反面无色。分生孢子梗菌丝的短侧枝,多分枝,多为椭圆形或长方形,透明,壁光滑,成堆时绿色。
里氏木霉所产生的一种主要的纤维酶一纤维二糖水解酶I,由单拷贝基因编码,其产量可达里氏木霉胞外分泌性蛋白总量的50%[5]。因此,在对里氏木霉的遗传改造中,常利用纤维二糖水解酶I的启动子与终止子序列构建载体,并利用纤维二糖水解酶I的前导肽序列引导重组蛋白进行分泌性表达。里氏木霉具有极好的合成蛋白和分泌蛋白的能力;并具有真核的分泌机制,很可能还具有与哺乳动物系统相似的蛋白修饰性能。
2 里氏木霉产纤维素酶的诱导剂的研究
2.1材料与仪器
菌种:
里氏木霉Rut C-30:淮阴师范学院生命科学学院实验室保藏
原料:
马铃薯、琼脂、无菌水
预处理的秸秆、玉米浆购于淮安市百麦绿色生物能源有限公司
葡萄糖、硫酸铵、尿素、乳糖、低聚木糖、酒石酸钾钠、苯酚、偏重亚硫酸钠、柠檬酸购于国药集团化学试剂有限公司,分析纯AR
3,5-二硝基水杨酸(DNS)购于国药集团化学试剂有限公司,化学纯CP
硫酸镁、氯化钙、硫酸亚铁购于无锡市亚威化工有限公司,分析纯AR
磷酸二氢钾、氯化钴购于中国医药(集团)上海化学试剂公司,分析纯AR
硫酸锰购于上海试剂二厂,化学纯CP
氢氧化钠购于南京化学试剂有限公司,分析纯AR
仪器:源Y自:751W.论~文'网·www.751com.cn
超净工作台:HDL APPARATUS
恒温振荡箱:哈尔滨市东联电子技术开发有限公司
恒温培养箱:哈尔滨市东联电子技术开发有限公司
台式低速离心机:Eppendorf centrifuge 5418
恒温水浴锅:上海精密实验设备有限公司
p H 计:上海精科
立式电热压力蒸汽灭菌器:日产
光栅分光光度计:上海元析仪器有限公司
2.1.1 PDA培养基
马铃薯葡萄糖培养基是一种用来培养真菌的半合成培养基。此培养基是由马铃薯,葡萄糖,琼脂等组成。其中马铃薯煮汁可以提供碳源,氮源,无机盐和维生素等,葡萄糖主要作为碳源,琼脂为凝固剂。马铃薯的表皮中含有龙葵碱的化学成分,对菌丝生长有抑制作用,所以马铃薯在使用时要去皮。在PDA培养基上大多数真菌都可以良好生长。由于多数真菌喜欢偏酸性环境,而培养基灭菌过程中部分糖类会转化为酸,所以一般不需要调pH值。马铃薯浸出粉有助于各种霉菌的生长;葡萄糖提供能源;琼脂是培养基的凝固剂灭菌倒平板后的培养基24小时后未长杂菌为合格培养基,按无菌操作进行。
2.1.1.1 试剂和材料
马铃薯去皮 200g
葡萄糖 20g
琼脂 20g
水 1000mL
2.1.2 种子培养基[6]
2.1.2.1 玉米浆种子培养基
0.2%玉米浆、0.14%硫酸铵、0.03%硫酸镁、0.1%葡萄糖、0.2%磷酸二氢钾,分装3ml在15*150mm的试管中,加塞子,120℃灭菌20分钟