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摘要: 对影响马疫链球菌发酵液中透明质酸的提纯条件进行优化研究。对得到的发酵液进行HA分离提取;分别对发酵液的预处理、除菌体、分离、纯化、干燥、粉碎等工艺条件进行了研究，通过检测HA得率,分子量损失和蛋白去除率等指标,选择出最佳的提取方法和条件,通过条件优化，在保证透明质酸得率的前提下，使提纯产品的纯度、分子量达到较高水平，获得了一套可用于发酵法生产HA的下游分离工艺路。最后得到的HA产品为白色粉末,HA得率约44.4%,分子量高于2.5x105。7815
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关键词：透明质酸；发酵；分离提取
Purification of hyaluronic acid fermentation broth
Abstract: Streptococcus affecting horses hyaluronic acid fermentation broth of purification conditions were optimized. The resulting fermentation liquid separation and extraction HA; were pre-fermentation solution, sterilization body, separation, purification, drying, grinding and other process conditions were studied by detecting HA yield, molecular weight loss and other indicators of protein removal select the best methods and conditions of extraction, through optimization, to ensure the rate of hyaluronic acid obtained under the premise that the purity of the purified product, the molecular weight to achieve a higher level, to obtain a fermentation method for producing a downstream HA separation process road. The resulting product is a white powder HA, HA yield of about 44.4%, higher molecular weight than 2.5x105.
Keywords: hyaluronic acid; fermentation; separation and extraction
目录
摘要..i
Abstract .i
目录.ii
1.绪论..1
1. 1透明质酸的结构和理化性质.1
1.1.1透明质酸的结构1
1.1.2透明质酸的分布及理化性质..2
1.2 透明质酸的用途...........2
1.2.1 透明质酸的生理功能..2
1.2.2 透明质酸在化妆品工业上的应用..3
1.2.3 透明质酸在医学上的应用..3
1.3 透明质酸的制备方法..3
1.3.1从动物组织中提取透明质酸.3
1.3.2发酵法提取透明质酸.4
1.3.3 发酵生产HA分离提纯方法概述..4
1.4 本课题研究的意义和内容.6
2. 材料和方法6
2.1 试剂和仪器6
2.2 实验方法7
2.2.1 分离步骤.7
2.2.2 测定方法.7
3. 结果与讨论 .10
3.1 发酵液预处理结果10
3.1.1 热处理10
3.1.2 酸处理10
3.1.3 离心处理..10
3.1.4 预处理结果比较..10
3.2 醇沉结果..11
3.3 活性炭处理结果11
3.3.1 活性炭处理用量11
3.3.2 活性炭处理次数..12
3.4 CPC处理结果.12
3.4.1 CPC处理用量.13
3.4.2 NaCl解离用量13
3.4.3 乙醇沉淀13
3.5 干燥粉碎14
3.6 下游工艺流程总括..14
小结.16
致谢.16
参考文献.17
1.绪论
1.1透明质酸的结构和理化性质
1.1.1透明质酸的结构
透明质酸(Hyaluornieaeid,简称HA)又名玻璃酸,是由Meyer于1934年首先从牛眼玻璃体中分离得到的一种直链酸性粘多糖，分子量为1.0xl05～4.0x106Da之间，其分子结构是由N-乙酞葡萄糖胺和葡萄糖醛酸通过β-l,4和β-1,3糖苷键反复交替连接而成。[1]
1.1.2透明质酸的分布及理化性质
（1）透明质酸的分布
透明质酸是一种天然的生物聚合物,在细菌和机体内有着重要的功能。在链球菌中透明质酸主要存在于荚膜中。透明质酸还存在于高等动物组织中,特别是作为一种细胞间填充物,眼睛玻璃体和关节滑液中透明质酸浓度最大。
HA广泛的分布在各组织中,在体内除具有保湿、调节渗透压、形成网状屏障调节大分子物质的扩散、润滑关节等物理化学功能之外,近几年通过研究发现,HA还在组织生成、创伤愈合、肿瘤入侵和调节细胞功能诸多方面具有重要的生理功育旨。透明质酸溶于水,不溶于有机溶剂如甲醛、酒精、丙酮、氯仿等,无、无免疫性、具有良好的生物相容性。产品可通过红外吸收、电泳、透明质酸酶菌体的分解实验确定。[2]