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摘要耐热DNA聚合酶的使用大大地简化了PCR操作过程，扩大了PCR技术的应用范围。本课题是运用基因工程技术将从嗜热菌Thermus aquaticus中克隆获得Taq DNA聚合酶的基因进行蛋白融合及定点突变改造，并建立重组Taq酶的大肠杆菌高效表达体系，诱导表达、提取和纯化获得纯重组酶，并将其应用到不同的PCR体系中，从而验证重组酶的活性，进一步完善了新型的DNA聚合酶Taq的一般扩增方案。随着DNA聚合酶研究的发展，PCR技术的应用范围也在不多的拓宽。怎样进一步改善耐热性DNA聚合酶的酶学性能，解决DNA聚合酶高效性与保真性之间的矛盾，已成为广大分子生物学研究者关注的热点。本实验所涉及的pfu-x7 和Tap-omni DNA聚合酶，通过对其性质的比较研究发现，它们在DNA聚合酶的高效性和保真性方面确实有了更好的加强。7750
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关键词 Tap-omni pfu-x7 高效性 保真性
毕业设计说明书（论文）外文摘要
Title Comparison of several high-temperature polymerase
Abstract
The use of thermostable DNA polymerase greatly simplified the PCR procedure, and expanded the application rage of PCR technology. This topic is the use of genetic engineering technology from the thermophilic bacterium Thermus aquaticus cloning get in Taq DNA polymerase gene fusion protein and site-directed mutagenesis transformation，And to establish a restructuring of e. coli Taq enzymes to efficiently express system, inducible expression, extraction and purification of pure recombinant enzyme, And apply it to different PCR system，To verify the activity of the recombinant enzyme, Further improve the new general amplification of Tap DNA polymerase .
With the development of DNA polymerase, the scope of application of PCR technology are few expanding，How to further improve the enzymatic properties of the heat-resistant DNA polymerase, to solve the contradiction between the efficiency and fidelity of DNA polymerase, has become the focus of attention of the majority of molecular biology researchers.
Pfu-x7 DNA polymerase and Tap-omni DNA polymerase involved in this experiment, Found that by its nature, efficiency and fidelity of DNA polymerase does have a better strengthen。
Keywords pfu-x7 Tap-omni efficiency fidelity
目 录
1绪论 1
1.1聚合酶链式反应（PCR）简史 1
1.2常见几种高温聚合酶 4
1.3 DNA聚合酶的研究现状和意义 5
2 DNA聚合酶的表达、提取与纯化 8
2.1 DNA聚合酶的提取 8
2.2 Taq-omni DNA聚合酶的纯化 9
2.3 DNA聚合酶的SDS-PAGE电泳 11
3 性质与比较 15
3.1 pfu-x7与pfu对不同含量dutps效力比较 15
3.2Taq-omni 聚合酶与Tap酶扩增长片段基因能力的研究 17
4、仪器与试剂 18
4.1实验设备 18
结 论 20
致 谢 21
参考文献 22
1 绪论
1.1聚合酶链式反应（PCR）简史
20世纪50年代分子生物学创立，在近60年的时间里，其理论与技术己渗透到生命科学的各个领域，极大促进了原有学科的发展，同时也派生出许多新的学科。如今，以分子生物学为核心的生物技术与微电子技术一起已成为21世纪的支柱产业。而作为生物工程产物的聚合酶链式反应技术的问世，又使分子生物学方法实现了惊人的转变，它己成为DNA实验室不可或缺的组成部分，正在现代分子生物学及与之相关的研究中发挥着重要作用。
1.1.1 PCR反应的建立