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摘 要：本研究通过安琪酵母粉中提取酵母纯培养，配制YPD培养基采用梯度稀释接入培养基进行活化，接着再配制YPD培养基采用梯度稀释进行初选，采用涂布平板法进行复选，最后采用划线培养并进行酵母镜检。确定酵母菌为纯培养物后将酵母接种到YPD液体培养基进行扩大培养，作图分析，作出生长曲线。利用超声破碎处于对数期的酵母以提取所需蛋白，利用柱层析分离不同分子质量的蛋白质混合液，再利用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳对分离得到的蛋白质进行鉴定。通过生物信息学研究Trr2p蛋白的相对分子质量，以确定所分离出来的蛋白是否为Trr2p蛋白。结果表明，28℃条件下接种后6—18小时的酵母处于对数期，分离得到的蛋白质相对分子质量37KDa，与Trr2p的理论值相符。结果表明：可以在酵母菌中初步提取Trr2p蛋白，以便于对其做更进一步的研究。
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关键词：酵母；蛋白；对数期；柱层析；SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳法7733
Extraction and Separation of Trr2p Protein from Yeast
Abstract: This investment isolates the pure culture of yeast from Anqi yeast powder . They were activated by gradient dilution using YPD culture medium. After that, confecting YPD medium screens the yeast for the first time and adopting spread plate method to screen twice. Finally, using streak plate method to culture the yeast and then conduct microscopic examination. We will inject the yeast into YPD liquid culture medium when we can ensure the yeast was pure culture. mapped analysis and made the growth curve. Broken yeast in the log phase to extract the desired protein using ultrasound, separation the protein mixture of different molecular weight by using column chromatography, using SDS polyacrylamide gel electrophoresis to isolate identified proteins. Through the biological information of relative molecular to invest Trr2p protein, to identify the isolated protein is Trr2p protein. The results show that, at 28 ℃ after 6 -18 hours the yeast will be in logarithmic phase separation, protein has a relative molecular mass of 37KDa, consistent with the theoretical value of Trr2p.The reasuls show that: we can do primary extraction of Trr2p protein in yeast, in order to do further research.
Key words：Yeast; Protein；Log phase；Column Chromatography；SDS Polyacrylamide Gel Electrophoresis
目 录
摘 要 1
引 言 2
1.材料和方法 2
1.1 实验材料 2
1.2 培养基和缓冲液 2
1.3 试验方法 4
2.结果与结论 6
2.1 酵母菌活化与复选结果 6
2.2 酵母菌的显微镜检结果 8
2.3 酵母菌生长曲线测定结果 8
2.4 电泳检测破碎效果结果 9
2.5 SDS-PAGE结果 9
2.6 利用生物信息学得到的相关结果 10
3.结论 13
参考文献 13
致 谢 15
酵母Trr2p蛋白的提取与分离引言
Trr2p(硫氧还蛋白还原酶)广泛存在于细菌、真菌、脊椎动物以及人类等的细胞中，是NADPH依赖的含有FAD结构域的硒酶，属于吡啶核苷酸-二硫化物氧化还原酶家族成员.，通过NADPH传递电子起到还原硫氧还蛋白的功能[1]，与NADPH、硫氧还蛋白共同构成了细胞的硫氧还蛋白系统.Trr2p有许多重要的生物学功能,与人类多种疾病的发病机制有重大关联，对于Trr2p做深入研究对生物医药的发展以及延长人类寿命有重要意义[2-4]。
酵母菌是一类单细胞真菌，在自然界分布广泛，主要生长在偏酸性的潮湿的含糖环境中[5]，是人类文明史中被应用得最早的微生物之一。Trr2p是酵母菌抗氧胁迫系统的重要组成部分，是一种硒酶，Trr2p蛋白是线粒体内直接行使氧化作用的酶之一[6~10]。对于文持细胞的氧化还原状态具有重要作用，Trr2p在酵母菌中的存在有利于酵母菌的抗氧化性和对甲萘醌的耐受性[11]。