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3.1 植物内生真菌的分离纯化 7
3.2 内生真菌的抗肿瘤活性检测 9
3.3 内生真菌的分子鉴定 9
3.4 内生真菌的形态特征 10
4 讨论 11
致谢 11
参考文献 12
1 引言
1.1内生真菌的发展
植物内生真菌(Endophytic fungus)是指通常不会使宿主植物得病但生存于其体内的一类真菌¬[1]，是构成植物微生态体系的一部分天然物质，长期在植物组织内的特殊条件下生活，其代谢产物类型众多、活性丰富，已慢慢成为开发新的生物活性物质的主要渠道。一¬直以来植物都是开发天然药物的主力原材料，他们拥有活性丰富类型众多的代谢产物，更重要的是，微生物种类多、繁殖快、分布广的优点且其绝大多数还没有被研究过，所以入手筛选新颖、有效的治疗新药或抗菌活性物质极具潜力。近些年,中外都有发表从好几种植物中分离发现具产药理活性的内生真菌。从早期的紫杉醇开始，人们便开始了从植物内生菌中探索新活性物质的征程，后来相继发现了尖镰孢菌(Fusarium oxysporum Schlecht )等物质[2]，都对于抗癌有一定疗效，毫无疑问，通过从内生真菌中筛选可开发各种新型自然产品，这已成为新药研究的一大热点。
1.2菌种
分别于2015年12月在江苏无锡、安徽等地采集新鲜、健康的植物标本，通过分离植物组织获得多种植物内生菌，对其纯化，并发酵培养，利用抗肿瘤体外细胞毒筛选模型(MTT法)对内生真菌的代谢产物展开活性检测，检测其代谢产物的抗肿瘤性从中筛选出有高抗肿瘤活性的菌株，然后提取目标内生真菌的DNA并扩增其18SrDNA 测序，在数据库进行Blast，并结合产孢情况和菌丝形态鉴定目标内生真菌的分类地位。
1.3 内生真菌的抗肿瘤活性源`自·751.文/论:文'网,www.751com.cn
从植物内生真菌研发抗肿瘤药物是当今一大研究热点，尽管国内起步稍晚，可是进步幅度很大，短期内就获得较大进展。1971年研究人员就已从红豆杉中分离出一种带有抑制微管解聚效果的二萜类生物碱紫杉醇，对治疗部分癌症有较好作用。但问题是紫杉属植物资源稀少并且生长时间较长，于是1993年Strobel等人为开辟产紫杉醇的新路，经过不懈努力再次通过短叶紫杉(Taxus brevifolia)[3]分离得内生真菌Taxomyces andreanae，通过发酵再分离出紫杉醇。随后国内也紧跟步伐，从南方红豆杉(T. mairei)[4]、云南红豆杉(T. yunnanensis)[5]、欧洲紫杉(T. baccaya)等植物中分离内生真菌，探索挖掘紫杉醇且收获颇丰。