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毕业论文关键词：异色瓢虫；冷驯化；转录组；DGE；抗寒基因；低温储存
Key words: Harmonia axyridis; Cold acclimation; Transcriptome; DGE; Cold-resistant Gene; Cryopreservation
目 录
1 材料与方法 5
1.1 试验虫源和实验种群的饲养 5
1.2 仪器与试剂 6
1.2.1 主要仪器与设备 6
1.2.2 主要试剂与药品 6
1.3 实验方法 6
1.3.1 转录组和DGE 处理分析方法 6
1.3.2 异色瓢虫抗寒基因筛选 6
1.3.3 异色瓢虫抗寒基因的引物设计与合成 6
1.3.4 异色瓢虫过冷却点测定 7
1.3.5 异色瓢虫最佳冷驯化条件探索 7
1.3.6 异色瓢虫低温储存 7
1.3.7 异色瓢虫总RNA 的提取 7
1.3.8 cDNA 第一链的合成 8
1.3.9 实时荧光定量PCR及数据分析 8
2 结果与分析 8
2.1 异色瓢虫常温条件和低温诱导条件下转录组序列长度分布统计分析 8
2.2 异色瓢虫抗寒基因筛选 9
2.3 异色瓢虫最佳冷驯化条件探索结果分析 10
2.4 异色瓢虫低温保存期间存活情况和过冷却点变化情况 11
2.5 异色瓢虫低温保存下抗寒基因表达情况 12
3 讨论 13
异色瓢虫Harmonia axyridis Pallas，属鞘翅目（Coleoptera），多食亚目（Polyphage），瓢虫科（Coccinellidae），肩突瓢虫族（Synonychini），和瓢虫属（Harmonia）[1]。异色瓢虫在俄罗斯阿尔泰山脉以东的广大地区及萨哈林岛、库页岛、中国、蒙古、朝鲜、日本等地均有分布，所以又被称为亚洲瓢虫[2]。作为一种重要捕食性昆虫资源，异色瓢虫是许多害虫的天敌，主要对蚜虫、蚧壳虫、粉蚧、木虱、螨类以及某些鳞翅目、鞘翅目害虫的卵和低龄幼虫具有控制作用，特别是对蚜虫的生物防治效果较好[3]。同时，异色瓢虫作为瓢虫科中较为常见的种类，具有食量高，产卵量大，抗逆性强等特点[4]，因而其在生物防治方面具有良好的应用前景，并且可有效减少农药对环境和生物的危害。我国是农业大国，富有异色瓢虫资源，在异色瓢虫的开发利用方面具有明显的优势和较大的空间。
异色瓢虫作为一种重要的天敌昆虫资源，在原产地和引入地均发挥了重要的生物防治作用[3]。虽然其在天敌防治中具有重要作用，但是由于以下这些因素导致其不能大量的应用于规模化生产，这些因素包括：自残损耗[5]；人工饲养[5-7]；低温储藏[5,8-10]。因此，实际应用过程中异色瓢虫容易出现“货架期短”的状况。昆虫对低温适应策略是多样的，其中冷驯化能够显著增强抗寒能力。自然条件下，异色瓢虫越冬前经历一个自然驯化的过程，在逐渐降温的过程中受到了驯化，提高抵抗低温的能力。例如，每年东北地区大量的异色瓢虫聚集越冬，有丰富的瓢虫资源可以开发应用。实验条件下，短时低温冷驯化也可以显著提升异色瓢虫的抗逆能力[11-14]，但是异色瓢虫是如何在分子生物学上做出适应性调整以度过冬季低温环境的，及体内物质是如何被通过相关基因进行调控的，关于这些有关异色瓢虫耐寒性及其越冬策略的系统性研究还较少。