随着生物育种技术的发展,分子标记技术也随之变得愈加重要,SSR分子标记技术是分子标记技术中的代表[4]。SSR 也称为微卫星DNA (microsatellite DNA)、短串联重复(tendom-repeats)或简单序列长度多态性(simple sequence length porlymorphism), 每个SSR分子标记两端的序列一般是相对保守的单拷贝序列,通过这段序列可以设计一段互补寡聚核苷酸引物,再通过对SSR分子标记进行PCR扩增,扩增产物通常采用高浓度的琼脂糖凝胶或丙烯酰胺凝胶电泳检测结果,从结果中可以查找SSR多态性引起简单序列重复次数的差异,这种表现为共显性[5]。其次SSR分子标记还具有多态性比较高、标记数量众多和重复序列比较稳定等优点[4],这些优点在植物构建遗传图谱、种子资源的评估、基因定位、分子标记辅助选择、品种真实性和种子纯度鉴定等育种领域有很好的应用价值。
由于长期的定向遗传,大麦的遗传慢慢的趋于一致,而新的抗逆品种在各个方面突破又微乎其微[15],此时对大麦遗传多样性的研究就显得尤为重要。遗传多样性是能够代表种群中存在的差异变化,也可以用在不同的个体之间,表示物种种群和个体遗传变异的合集[14]。虽然之前有很多人做过相似的研究,但是受研究的材料和SSR标记的引物数量限制,无法做到完全的代表性。本研究利用70个SSR合引物对277份世界不同地区的大麦进行遗传多样性分析,目的就是为了找到大麦之间的遗传差异和亲缘关系,为后人研究大麦遗传多样性研究提供参考[15]。
1 试验材料、实验试剂与实验器材
1.1试验材料
277份世界各地大麦品种,其中33份为非洲地区的大麦品种。
1.2 实验试剂
液氮、3% H2O2、十六烷基三甲基溴化铵(阳离子去污剂)、氯仿、异戊醇、异丙醇、75%酒精、2×Specific Taq Master Mix、2×Taq PCR Master Mix、硝酸银、5×TBE、4% PA、10%Ammonium persuifate、TEMED、三羟甲基氨基甲烷(Tris)、硼酸、0.5mol/l EDTA、Loading Buffer、DL2000 DNA Marker、DM1001、甲醛、单蒸水、ddH2O(双蒸水)氢氧化钠、四硼酸钠、过硫酸铵、丙烯酰胺、甲叉双丙烯酰胺。
1.3 实验器材
培养箱、2ml离心管、1.5ml离心管、量筒、烧杯、玻璃棒、搅拌仪、研磨仪、水浴锅、灭菌锅、冰箱、制胶模具、微波炉、离心机、电泳仪、PCR仪、镊子、烘干机、移液枪、PCR板、移液枪枪头、一次性橡胶手套、记号笔。
2实验方法
2.1大麦种质资源获取
286份大麦种质资源由指导老师提供,并按照顺序1—286编号完成,由于各个品种的大麦叶片是指导老师事先已经采集完成,存放在冰箱中保存中的,但因材料众多,储存时遗失个别材料,遗失的材料编号是:98、137、188、278、280、281、283、285、286。所以共有277份大麦种质资源被用到本次实验当中,其中非洲地区大麦品种33个