犬类TLR5基因的克隆及分析(3)

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TLR家族胞外域结构-Toll样受体与配体复合物结构的研究进展

图1-1 TLR家族胞外域结构-Toll样受体与配体复合物结构的研究进展

TLRs是机体抗感染的第一道屏障。有研究表明，TLR5在肿瘤的起始发展及对抗癌症的天然免疫中[18]、在肠道细菌防御上[19]起到了决定性的作用，可能直接或间接地参与变应性鼻炎的发病过程[20]。而TLR5能够特异性识别鞭毛蛋白，并且鞭毛蛋白是目前为止发现的TLR5的唯一配体[21]。TLR5与鞭毛蛋白结合后可以激活MyD88依赖通路。对于犬类TLR5分子结构与抗病机制的进一步研究，可以阐明其复杂的非特异性免疫机理，为犬类的分子抗病及其育种做了良好的铺垫工作。

2材料与方法

2.1材料

2.1.1血液、质粒与菌株

新鲜血液采自徐州某宠物医院，E.coli DH5α感受态购自TIANGEN公司，pCR2.1克隆载体购自Invitrogen公司。

2.1.2主要实验试剂

血液基因组提取试剂盒购自TIANGEN公司；PrimeSTAR@ HS DNA Polymerase with GC Buffer购自宝生物工程（大连）有限公司；SanPrep柱式PCR产物纯化试剂盒、IPTG（异丙基硫代-β-D-半乳糖苷）、X-gal（5-溴-4-氯-β-D半乳糖苷）购自生工生物（上海）股份有限公司；余下的常规试剂全为国产或者进口分析纯。

2.1.3主要实验仪器

分光光度计Biophotometer购自Eppendorf公司；高速台式离心机TGL-16G购自上海安亭科学仪器厂、GeneAmp® 9700型PCR仪购自ABI公司；电热恒温培养箱和恒温培养摇床THZ-100B均购自上海一恒科学仪器有限公司；电热恒温水浴锅DK-S24购自上海精宏实验设备有限公司。