中华按蚊DNA克隆的荧光原位杂交

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摘要：疟疾是一种在世界各地均有发生的急性传染病，它严重危害着人类的健康。疟疾由疟疾原虫引起，并能通过雌性按蚊的叮咬在人群中广泛传播。中华按蚊是我国中部广大平原地区传播间日虐原虫的重要传播媒介，也是马来丝虫病的重要媒介之一。按蚊也是一种用于研究多线染色体的模式昆虫。荧光原位杂交技术作为一门新兴的分子标记技术，与传统的放射性标记原位杂交技术相比，具有快速、灵敏度高、检测信号强的特点，可以用于确定DNA或cDNA克隆在其染色体上的精确位置以及基因片段的方向性，为研究按蚊物理图谱的构建提供了技术支持。42569

毕业论文关键词：按蚊；染色体；基因组；荧光原位杂交

Chromosome Maps And Physical Maps Of Anopheles Mosquitoes And Fluorescence In Situ Hybridization

Abstract： Malaria can do serious harm to human healthy as a kind of emerging infectious disease which can be found all over the world. Malaria is caused by plasmodium and it can be wildly spread among the crowd through the bite of female Anopheles mosquitoes. Anopheles mosquitoes is one of the most important media for the transmission of Plasmodium vivax and Malayan filariasis in the plains of central China. Anopheles mosquitoes is also a model system in polytene chromosome study. Fluorescence in situ hybridization has advantage of rapid, high sensitivity and displaying strong signal compared with the traditional technique of radioactive marker in situ hybridization. Fluorescence in situ hybridization can be a way to confirm the exact location and direction of DNA or cDNA on chromosome, offering technical support for the construction of the physical map of Anopheles mosquitoes.

Key words: Anopheles mosquitoes; chromosomes; fluorescence in situ hybridization

摘要 1

关键词 1

Abstract 1

Key words 1

引言 1

1.材料与方法 3

1.1供试蚊虫和实验仪器 3

1.2实验方法 3

1.2.1解剖材料的制备 3

1.2.2多线染色体玻片的制备 3

1.3荧光探针的制备 4

1.3.1引物的设计 4

1.3.2中华按蚊基因组总DNA的提取 4

1.3.3目标DNA片段的回收 4

1.4目标片段的回收 5

1.5荧光探针的制作 6

1.6荧光探针与多线染色体杂交 6

1.6.1预杂交 6

1.6.2荧光原位杂交 6

1.6.3洗玻片 7

1.6.4信号的观察与定位 7

2.结果与分析 7

3.讨论 11

致谢 11

参考文献 11

中华按蚊DNA克隆的荧光原位杂交疟疾（malaria）是由一种由疟原虫（Plasmodium）引起的，可以通过雌性按蚊（Anopheles）叮咬传播的全球性急性寄生虫传染病。它和艾滋病、结核病一起被世界卫生组织列为全球急需控制的三大公共卫生问题。根世界卫生组织估计，全世界每年有一亿以上的疟疾病例需要治疗。在蚊虫肆虐的热带地区，由于蚊虫的孳生不可能完全清除，疟疾的广泛传播成为了一个棘手的难题。据统计，非洲地区仅每年死于疟疾的14岁以下儿童人数就超过了100万[1]。因为不同按蚊种群的防治方法不同，防治按蚊变得更加艰难。确定我国不同疟疾流行区域按蚊种群构成，在进行防治时根据种群类别选择不同的防治策略和技术方案，可以有效地提高按蚊防治效果。一般来说，依靠按蚊的外部形态特征来鉴定品种是最为简便的方法，但许多外部特征的描述都是较为模糊且主观性较强的，一些近似种在外部形态上也并不具有太大的区别——这些因素都容易造成鉴定的结果不准确。然而，按蚊具有结构特征明显的染色体，不同物种的按蚊体内的多线染色带型也不尽相同。通过荧光原位杂交技术建立高分辨率的多线染色体图谱和染色体物理图谱，能够对种群鉴定，特别是近似种或近缘种的鉴定起到积极地作用。在我国，中华按蚊是中部广大平原地区传播间日虐原虫的重要传播媒介，也是马来丝虫病的重要媒介之一。与此同时，中华按蚊也是研究多线染色体（polytene chromosome）的模式昆虫。多线染色体是在双翅目昆虫的某些细胞中存在的一种巨型染色体，由于它的巨大的形态，已被广泛地应用于生物的细胞遗传、分类、基因的定位和克隆及基因结构的研究[2]。荧光原位杂交是根据核酸碱基互补配对原则用半抗原标记DNA或者RNA探针与经过变性的单链核酸序列互补配对，通过带有荧光基团的抗体去识别半抗原进行检测，或者用荧光基团对探针进行直接标记并与目标序列结合，最后利用荧光显微镜直接观察目标序列在细胞核、染色体或切片组织中的分布情况[3]，可以用于确定DNA或cDNA克隆在其染色体上的精确位置以及基因片段的方向性，为中华按蚊物理图谱的构建提供了技术支持。