本实验以“蓝香水”月季为实验材料,从月季的增殖培养、防褐变剂的选择、外植体的选择、愈伤组织的诱导、增殖、再生和诱导生根等方面,研究月季组织培养技术,为月季快繁提供理论依据。
1.材料与方法
1.1实验材料
在周口市川汇区花卉市场购买月季品种“蓝香水”,从月季上选取当年生带侧芽的幼嫩茎段为实验材料。
1.2实验方法
1.2.1月季增殖培养的实验方法
在超净工作台上,将切成1.0~2.0cm长的茎段(带腋芽)用75%酒精浸泡30s,水冲洗2~3次;再用0.1%升汞消毒10min,然后无菌水冲洗5~6次,用灭菌的滤纸把茎段表面水吸干,放入无菌的培养皿中备用。
以MS为基本培养基,添加不同浓度的6-BA(0.5、1.0、1.5mg/L)、NAA(0.05、0.10、0.15mg/L),蔗糖浓度为30g/L,琼脂7g/L,pH5.8。材料在光照强度800~1300lx,温度25℃,光照时间15h/d条件下培养。每个处理30个茎段,重复3次,培养30d,统计增殖倍数、成活率并观察生长状况。
1.2.2防褐变剂选择的实验方法
将月季切成1.0~1.5cm长的茎段(带腋芽),用75%酒精浸泡30s,水冲洗2~3次;再用0.1%升汞消毒10min,无菌水冲洗5~6次,用无菌滤纸把茎段表面水分吸干,放入无菌的培养皿中备用。
在培养基MS+6-BA 1.5mg/L+NAA 0.05mg/L培养基上,添加不同用量的活性炭(1.5、2.5、3.5g/L)和抗坏血酸(0.5、1.0、1.5g/L),蔗糖浓度为30g/L,琼脂7g/L,pH5.8。并设置对照。在光照时间15h/d、温度23℃、光照强度800~1200lx条件下培养30d,统计并计算根条数、平均根长、发芽率、成活率。
1.2.3外植体选择的实验方法
在超净工作台中对试验材料做如下处理:先用75%酒精表面消毒20s再用7%~8%的次氯酸钠溶液消毒6min,无菌水漂洗3~5次。培养基为MS+6-BA 2.0mg/L+NAA 2.0mg/L+2,4-D 1.0mg/L,蔗糖30g/L,pH5.8,琼脂7g/L。在光照时间15h/d、光照强度1200~1500lx条件下培养。重复3次,培养4周后统计各外植体的诱导数,计算诱导率。
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