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摘要：目的 在体外检测重组蛋白IGF-1(insulin like growth factor-1)的活性。方法 用MTT法检测重组蛋白IGF-1对乳腺癌细胞株MCF7增殖作用的影响。加样后在CO2恒温培养箱中孵育3天加入MTT 15µL/well，4小时后加入三联液100µL/well，19h后用酶联免疫检测仪在波长570 nm，630 nm处测量各孔OD值。结果 SBI生产的IGF-1可刺激MCF7细胞增殖，且其作用效果随其浓度的增加而增加，SBI生产的IGF-1和Peprotech的IGF-1的生物活性相当，而与R&D的相比较，生物活性较差。结论 SBI生产的IGF-1是有活性的，R&D公司的重组蛋白IGF-1活性最好。39108
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毕业论文关键词：MCF7细胞株；重组蛋白IGF-1； MTT比色法；
The assay of activity for recombinant protein IGF-1 in human breast epithelial cells MCF7
Abstract：Objective To assay the activity of recombinant protein IGF-1 in vitro. Methods To detect the proliferation of recombinant protein IGF-1 on MCF7 breast epithelial cells line by MTT assay.Cells are added MTT 15µL/well which incubated three days in CO2 incubator after adding sample,and added the joint fluid 100µL/well after 4 hours, 96 - well plates are determined by enzyme-linked immune metric at 570nm,630nm.
Result The IGF-1 of SBI can stimulate the proliferation of MCF7，and its effect increases with the increase of its concentration, The IGF-1 biological activity of SBI be equivalent to Peprotech’s ,while is poorer than R&D’s. Conclusion The IGF-1 of SBI have the activity,The IGF-1 activity of R&D is the best.
Key words：MCF7 cells; IGF-1; MTT assay
引言：
胰岛素样生长因子-1(IGF-1)是由第12号染色体上的基因编码的7.7kDa的单链多肽蛋白，由70个氨基酸组成的IGF-1蛋白包括四个功能区域，在活体中可在GH刺激下直接产生[1]。IGF-1基因的表达由转录和译后修饰决定[12]。胰岛素样生长因子系统(insulin-like growth factor system,IGFs)包括IGF多肽(IGF-1、IGF-2)、两种IGF受体(IGFR)、6种胰岛素样生长因子结合蛋白(insulin-like growth factor binding protein, IGFBP)1～6以及一组胰岛素样生长因子结合蛋白酶[7]。
胰岛素样生长因子-1(IGF-1) 是在生长激素刺激下产生的一种活性蛋白多肽物质，是通过内分泌、自分泌和旁分泌的三种途径产生的低分子多肽[1]。根据研究，IGF-1对人体有广泛的生物学效应，如：增加肌肉量，减少脂肪，增加骨质密度，有助于文持神经系统的正常功能，增加免疫功能[13]。IGF-1还有降血糖、血脂、舒张血管、促细胞分化、生长，促创伤修复等功能，在临床医学上的应用有骨质疏松、糖尿病、心血管疾病等。IGF-1在婴儿的生长和在成人体内持续进行合成代谢作用上具有重要意义。国内有学者研究证明GH不缺乏矮小儿童的血清IGF-1与正常儿童无差异，但其血清IGF-1水平低于正常儿童[14]。
近年来，学者对它的研究逐渐深入。许多研究者证明了IGF-1和各种肿瘤之间的关系，例如，乳腺癌、卵巢癌、子宫内膜癌、膀胱癌等[11]。体内和体外模型、临床和流行病学数据已经证实了乳腺癌中内分泌，旁分泌和自分泌的IGF-1作用[3]。虽然许多于此有关的分子途经和胞内反应仍有待阐明，但是越来越多的证据指出了IGF-1系统在乳腺癌发育、发展和新陈代谢中起到重要的作用[2]。胰岛素样生长因子(IGF)可以抑制细胞凋亡的速度，刺激细胞增殖活性,血清高浓度的IGF是乳腺癌高发的重要因素[2]。
IGF-1与II型糖尿病神经病变(DNP)有关，研究表明，II型糖尿病患者血浆中IGF-1,2的水平显著下降，其主要是因为DNP 患者体内IGFBP-1水平升高，使游离的IGF-1水平下降[6]。
IGF-1及其结合蛋白1(IGFBP-1)在产科领域中的作用与应用逐渐被认识。IGFBP-1作为一种内分泌因子,在妊娠的不同时期,通过其含量和磷酸化程度的变化来调节IGF-1,与妊娠高血压疾病、妊娠期糖尿病、胎儿生长发育异常等妊娠期疾病以及胎膜早破、预测早产密切相关[7]。