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1.实验材料与仪器
1.1实验材料
番茄白粉菌为本实验室保存的中国生理小种(Oidium neolycopersici)。
拟南芥RNAi干扰库种子,由周口师范学院植物遗传与分子育种重点实验室提供。
1.2实验试剂
潮霉素;MS培养基;10%次氯酸钠;无水乙醇;DAB染色剂;冰醋酸;台盼蓝染色剂。50mg/mL的潮霉素溶液;固定液(无水乙醇:冰醋酸=3:1);0.3%的台盼蓝溶液,DAB溶液(1mg/mL,pH3.8)。
1.3实验仪器
一般用正立显微镜;超净工作台;光照培养箱;电热恒温水槽;
电子
天平;冰箱。
2.试验方法
2.1拟南芥RNAi干扰库种子消毒
将拟南芥RNAi干扰库种子250、350在无菌操作条件下种植到玻璃皿中,利用潮霉素浓度千分之一的MS固体培养基筛选出正常的突变体植株。具体操作如下:首先,在超净工作台中,干扰库种子250、350先用75%无水乙醇消毒30-60s,用灭过菌的蒸馏水冲洗4-5次;其次,用2%次氯酸钠对种子消毒10min,之后用无菌水冲洗5-6次,充分洗掉次氯酸钠后,将突变体种子250、350种植到事先准备好的含有50mg/L潮霉素的MS培养基上,分别标记,封口;于4℃冰箱春化2-3d后,放入光照培养箱进行萌发。待萌发出两片真叶时即可移至灭过菌的营养土盆中栽种。
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