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摘要：本研究分析了病原菌细胞壁、IPTG、乳糖、葡聚糖对木霉T-Aloe产β-1,3-葡聚糖酶的诱导作用。SDS-PAGE蛋白电泳结果表明，木霉T-Aloe产生的葡聚糖酶为80KDa左右。酶活性分析表明，诱导24h时，在未加入任何诱导剂的情况下测得的酶活性较高，最高酶活为1.195 U/（ml•min）；当诱导72h时，除加入IPTG和乳糖为诱导剂测得的酶活有所下降，其余各组的酶活性均有所升高，其中加入病原菌细胞壁的的两组酶活增加较多，分别提高0.116U/（ml•min）、0.148U/（ml•min）。40448
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毕业论文关键词：功能分析；木霉T-Aloe；葡聚糖酶
Function analysis of β -1,3-glucanase from Trichoderma T-Aloe
Abstract：The inductions of β-1,3-glucanase by pathogen cell wall, IPTG, lactose, glucanase were analyzed. The protein of 80KDa expressed was determined by SDS-PAGE protein electrophoresis. Enzyme activity analysis showed that the highest activity was 1.195 U / (ml•min) when being added any inducer after culturing 24h. Enzyme activity of other tests all increased in addition to IPTG and lactose inducers after culturing 72h. The increase of activity was much higher when pathogenic bacteria cell wall was added. These were 0.116 U / (ml•min)、0.148 U / (ml•min).
Keywords: Functional analysis; Trichoderma T-Aloe; Glucanase
目 录
摘 要 1
引言 1
1. 材料与方法 2
1.1 材料 2
1.1.1 实验材料及试剂 2
1.1.2 实验设备 2
1.2 实验方法 2
1.2.1 木霉菌株的活化 2
1.2.2 β-1,3-葡聚糖酶的诱导 2
1.2.3 酶活性测定 2
1.2.4 SDS-PAGE电泳 5
1.2.5 葡聚糖酶功能验证 7
2. 结果与分析 8
2.1 β-1,3-葡聚糖酶酶活测定 8
2.2 SDS-PAGE 蛋白电泳结果分析 10
3. 讨论 11
参考文献 12
致谢 14
木霉T-Aloe β-1,3-葡聚糖酶的功能分析 引言
木霉属于半知菌门，丝孢目，木霉属，常见的木霉有绿色木霉、康宁木霉、棘孢木霉、深绿木霉、哈茨木霉、长枝木霉等[1]。木霉菌可产生多种对植物病原真菌、细菌及昆虫具有拮抗作用的生物活性物质，比如细胞壁降解酶类和次级代谢产物，同时提高农作物的抗病性，促进植物生长和提高农产品产量，因此被广泛用于生物防治、生物肥料及土壤改良剂[2-3]。同时由于化肥农药的大量使用，导致土壤、地下水等污染严重，对环境较为友好的生物农药木霉菌受到了公众的广泛关注。木霉菌可用来防治病害或抑制病原的主要机制通常有五大类：产生抗生素、营养竞争、微寄生、细胞壁分解酵素、以及诱导植物产生抗性[4]。在这些机制中，细胞壁分解酵素在抑制病害上扮演着重要的角色，由于葡聚糖是真菌细胞壁的主要成分（除卵菌纲外），多项试验显示葡聚糖分解酵素，在使用时可直接分解真菌细胞壁[5]。而β-1,3-葡聚糖酶是一类能够水解以β-1,3-葡萄糖键连接的葡聚糖酶系，它广泛存在于真菌、细菌、藻类、软体动物和高等植物体内[6]。在高等植物中，它与植物细胞的分裂、小孢子发生、花粉萌发、种子萌芽等多种正常的生长发育有关，能够很好的抑制真菌细胞壁的形成，影响其正常生长繁殖，从而对植物病原真菌引起的病害有一定的防治作用[7]。
1. 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 实验材料及试剂