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2.2.2 cDNA的合成
(1)取0.5 mL EP管,加入1-5 μg总RNA,补充DEPC H2O至11 μL。在管中加1 μL10μM Oligo(dT)18 ,混匀后离心。
(2)将离心管放于70 ℃水浴10 min,冰上放置1 min。
(3)依次加入以下试剂:25 mM MgCl2 2 μL,10×PCR buffer 2 μL,0.1 M DTT 2 μL,10 mM dNTP mix 1 μL,摇匀后离心。
(4) 将上步EP管42 ℃水浴2-5 min。加入1 μL SuperscriptⅡ,42 ℃放置50 min。
将离心管置于70 ℃恒温15 min以终止反应。
(5)将1 μLRNase H加入置于冰上的EP管中,37 ℃水浴20 min。将cDNA保存于-20 ℃备用。
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