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    根据以上的资料可以看出除根瘤菌外的内生细菌存在于豆科植物的根瘤内是非常常见的征象,而且是多种多样的,该征象在根瘤菌研究领域越来越引起关注和重视。但是,较于根瘤菌,关于根瘤菌与根瘤中存在的非共生及其它内生细菌的文献比较稀缺,另外样本宿主植物的种类比较少。本文以219个大豆品种为接种对象,设置对照组,并对处理组接种根瘤菌USDA110,分离了两组样品大豆根瘤中的内生菌,分析了供试菌株对大豆根瘤中细菌群落结构的影响,阐述了根瘤内生细菌的分离、种类及其对根瘤菌USDA110结瘤的影响,此外,还对根瘤菌与大豆品种匹配性进行探究,并且对该类型的研究指出一些较为基础的看法和认识。
    一  大豆根瘤内生细菌的分离及对USDA110结瘤的影响
    在进行农业生产的时候,常常会出现过度使用化肥的现象,从而导致了土壤肥力降低和环境恶化等不良后果。微生物肥料受到普遍的重视主要是因为它具有以下几点作用,包括控制植物的成长、提高作物的单产、提高作物的质量、改良土壤的品质、文护生态环境的健康等。开展某些具促生效果的内生细菌和大豆根瘤菌复合接种效果评价研究,对开发功能复合型微生物菌剂,使微生物肥料产品更加多样可以说有非常深远的意义。
    慢生大豆根瘤菌在投入使用的过程中,常常具有着不适应周遭环境、占瘤率低和接种效果波动性大等问题,限制了其的进步。最近几年,根瘤菌剂已由单一菌种、单一功能向复合菌种,多功能方向进步,将慢生大豆根瘤菌与PGPR菌株复合,对于共生固氮及促生有积极的帮助,据此它已经作为了大豆根瘤菌剂和除此之外的微生物制剂的主要探究途径[8-9]。一些植物根际促生菌(PGPR),比如胶质类芽抱杆菌,属于根际促生菌,可以释放钾素,合成有机酸、氨基酸、激素等,提高给植物的营养供给,进而帮助植物的成长[10-11];而慢生大豆根瘤菌采用与豆科植物共生固氮的方法,为宿主带去包含氮素的营养物质,从而增加大豆的单产,它通过代谢分泌出来的产物包括有机酸等,还可对Fe、P、Mg等矿物质进行络合,属于生态系统中最有份量的微生物资源[12]。
    目前国内PGPR和大豆根瘤菌单接种的相关研究报道比较普遍,但将它们两个进行复合接种得到的结果和产量增加的作用机制的相关研究比较稀缺。目前研究得知,Juge等[8]研究了慢生根瘤菌、固氮螺菌及丛枝菌根真菌采用不同结合的方法进行接种对大豆成长的影响,得出了任一微生物组合均可以增加大豆根系植物的单产;Argaw等[12]借由对双接种慢生根瘤菌、假单胞菌的分析和传统肥料对大豆结瘤、谷粒产量和产量因素等的影响,得出采用双接种可以使大豆的产出数量和产品质量获得最优的结果;Mary等[9]研究了慢生根瘤菌和芽抱杆菌在2种大豆上双接种的作用效果,发现接种菌株能提高大豆的结瘤数、根瘤鲜重和生物量;Oscar等[13]将一株能够生产高水平植物生长素、赤霉素和水杨酸的解淀粉芽孢杆菌与慢生根瘤菌一起接种,可以高效率地提高植物根系生长和大豆根瘤数目。胶质类芽抱杆菌属于PGPR,其自身就有非常好的促生作用,但其与大豆根瘤菌的复合接种效果和增产机理尚未有报道。因此,对大豆根瘤菌和胶质类芽抱杆菌采取复合接种的方法得到的结果及内在机制和理论的钻研,对改善根瘤菌共生固氮作用,具有重要应用前景和推广价值。本研究以从根瘤中分离的内生细菌和慢生大豆根瘤菌USDA110为研究对象,研究复合接种的作用效果,选取出一些促生功能的内生细菌。
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