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摘要：帕金森综合征（Parkinson’s disease, PD）是常见的神经系统变性疾病，Pink1/Parkin信号通路在帕金森发病进程中的关键作用已得到证实。筛选pink1/parkin信号通路的协同因子，以更好地了解该通路的构成以及对线粒体功能的影响。本实验以果蝇的S2细胞为模型，通过目标质粒的转染、相关药物的处理、应用免疫共沉淀、SDS凝胶电泳、蛋白质质谱等技术手段，筛选出协同因子。将Pink1和Parkin基因通过UAS-GAL4系统转染到S2细胞中，采用差异的转染方式以及MG132、CCCP的差异处理设置6个实验组，免疫共沉淀选出与转染基因相互作用的蛋白，然后将分离出来的蛋白用质谱法进行分析。通过对比质谱结果筛选出与本研究相关的协同因子，确定与其功能相关的蛋白。结果显示，clueless、Upf2、germ line transcription factor 1这3个蛋白与pink1和parkin都有结合，初步推测这3个蛋白与pink1/parkin通路可能有密切联系。34364
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毕业论文关键词：帕金森；PINK1；PARKIN；协同因子
Screening and Function of Proteins that Interact with Pink1 and Parkin in the PD Progression
Abstract: PD is one of the most common neurodegenerative disorder. The key role of Pink1/Parkin pathway in the PD progression had been proved. In order to get a better understanding of the mechanism and the impact on the mitochondrial function, we screen the cofactors of Pink1/Parkin pathway. We use S2 cell as the study model, applying transfection, drug treatment, IP, SDS-PAGE and MS to screen out proteins that interact with pink1 and parkin. Through transfect different plasmids, we set up six control groups. By appling IP technology, we can screen out specific proteins. Then we compare the MS results of the six groups to pick out the cofacters. Finally, the result show that the protein clueless, Upf2, germ line ranscription factor 1, interact with both pink1 and parkin and the study on their functions are under construct.
Key words: PD; PINK1; Parkin; Cofactor
目 录
引言 1
PD的发病情况及目前诊疗方案的缺陷 1
果蝇在作为模式动物研究帕金森的优势 1
1 材料与方法 2
1.1主要仪器 2
1.2 主要试剂与试剂的配置 3
1.3处理方式 3
2 操作流程 3
2.1载体的构建 3
2.1.1 PCR 3
2.1.2 琼脂糖凝胶电泳 4
2.1.3 酶切和酶连 4
2.1.4转化与质粒提取 4
2.2转染与药物处理 4
2.3免疫共沉淀 5
2.4 SDS-PAGE电泳 5
3 结果与分析 6
3.1 SDS-PAGE的结果 6
3.2 质谱的结果及分析 7
4讨论 7
致谢 8
参考文献 8
引言
PD的发病情况及目前诊疗方案的缺陷
帕金森综合症（Parkinson’s disease, PD）是常见的神经系统变性疾病，目前我国65岁以上人群总体患病率为1700／10万，并随年龄增长而升高[1]。随着人口老龄化的推进以及人口平均寿命的延长，PD的发病率呈明显上升，给家庭和社会都带来了沉重负担[2]。PD主要以黑质多巴胺能神经元进行性退变和路易小体形成的病理变化，纹状体区多巴胺递质降低、多巴胺与乙酰胆碱递质失平衡的生化改变，震颤、肌强直、动作迟缓、姿势平衡障碍的运动症状和嗅觉减退、便秘、睡眠行为异常和抑郁等非运动症状的临床表现为显著特征[3]。它是一种综合性神经系统变性疾病，其病因尚未明确，与多种因素有关，遗传因素、环境因素、年龄老化、氧化应激，甚至心理因素都有可能导致发病[4]。