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摘要:为了研究患病鲫鱼的心脏中是否有文隆气单胞菌(Aeromonas veronii)，我们从患病鲫鱼（Carassius aumtus)）的心脏中分离纯化获得一株细菌，并给其命名为MX,通过形态学观察、生理生化试验、16SrRNA的克隆并测序等鉴定方式。结果表明：该株细菌为革兰氏阴性短杆菌，在TSA培养基上都呈现为表面湿润，隆起，透明，边缘较整齐，乳白色的小菌落。且菌株MX 不发酵肌醇、卫矛醇、七叶苷、木糖醇等，硫化氢、MR、葡糖酸盐为阴性；尿素、OF、精氨酸双水解酶、蛋白胨水、VP试验为阳性，可以初步判断其为文隆气单胞菌（A.veronii）。接着对MX菌株进行16S rRNA基因序列测定，其序列长度为1509bp,并通过对其系统进化树看出，发现MX菌与文隆气单胞菌模式菌株（ATCC 35624）的亲缘性最近，并通过Megalign软件计算得出，MX菌株与文隆气单胞菌模式菌株（ATCC 35624）的同源性为99.87%，进一步鉴定MX菌株为文隆气单胞菌(A.veronii)。本研究不仅为鲫鱼细菌谱的扩充作出了贡献，而且对鲫鱼的养殖、疾病防治具有重要的意义。34362
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毕业论文关键词:鲫鱼；文隆气单胞菌；16SrRNA；生理生化试验
Isolation and identification of Aeromonas veronii from heart of Carassius aumtus
Abstract: A bacterial strain was isolated from the heart of Carassius aumtus and
named MX.The morphological characteristic、main biological characteristic and 16S rRNA Sequencing and ananalysis of phylogenetic tree were carried out in this study.we can draw the conclusion:The MX strain was a short ,gram and negative bacillus . TSA are presented in the media as the surface moist,bumps,transparence,edge than the neat,white small colonies.MX could not produce inositol, galactitol, esculin,xylosic alcohol and so on, hydrogen sulfide, MR, gluconate were negative; carbamide , OF, Argininase, peptone water and VP test were positive.It can be initially judged as Aeromonas veronii . Based on 16S rRNA Sequencing ,It’s length of sequence was 1509bp.The phylogenetic tree demonstrated that MX was closest to Aeromonas veronii ATCC35624,and the sequence homology was 99.87%,taken together,the strain MX was Aeromonas veronii.The study was not only contributing to the expansion of carp spectrum of bacteria, but also was of great significance for breeding, disease prevention of carp..
Keywords: Czrassius aumtus ;Aeromonas veronii;16SrRNA;biological characteristic
目录
前言 1
1 实验部分 2
1.1 材料 2
1.1.1实验动物 2
1.1.2 实验试剂及仪器 2
1.2 方法 2
1.2.1 菌种的分离纯化 2
1.2.2菌种的保藏 2
1.2.3 生理生化鉴定 2
1.2.4细菌基因组DNA的提取 2
1.2.5PCR扩增 3
1.2.6琼脂糖凝胶电泳 3
1.2.7胶回收 3
1.2.8TA克隆及测序 3
2、结果与分析 3
2.1细菌的形态学特征 3
2.2生理生化特性 4
2.316S rRNA克隆 5
2.416S rRNA序列分析 6
2.5检索并构建系统发育树 7
讨论 8
致谢 9
参考文献 9
前言
鲫鱼（Carassius auratus）属于常见淡水鱼，鲫鱼通过人工培育，能产生许多新型的鲫鱼品种。鲫鱼主要是植食性动物，在水中喜欢聚集在一块，它本身营养成分很丰富，肉质非常鲜美，而且它的药用价值高，被广泛应用在各种药材中，可为人体除羸祛乏，也可以开胃滋阴。鲫鱼生活的区域比较广泛，而且在春、秋两季的时候道尤为鲜美，是我国的重要食材之一。它身形在淡水鱼中较长，最大的长度可达30CM，生长和活动的区域深度也较深，最深可达20米，没有毒性，具有很高的经济价值，且物美价廉。鲫鱼在我国生长的区域属黄河和长江流域比较多见。鲫鱼具有繁殖能力强，生命能力强等特点，但近年其广受细菌性疾病的困扰，如迟钝爱德华菌[1]、温和气单胞菌[2]、这两种菌均可以引起鲫鱼生病甚至死亡。近几年由文隆气单胞菌（A.veronii）导致鱼类的生病和死亡也逐渐引起了一些学者的注意，所以我们这个实验目的研究的即是鲫鱼心脏中是否存在文隆气单胞菌（A.veronii），如果存在的话，怎样对其进行分离鉴定。经过了解，文隆气单胞菌（A.veronii）,是一种常见的可以引起水产动物疾病的致病菌，如已报道黄颡鱼【4】,患病的黄颡鱼出现离群独游、游动减缓、食欲减退并出现肛门红肿等症状；金鱼【5】，患病的金鱼出现反应迟钝、烂鳃、空肠、和血液不凝固等症状；框镜鲤【6】，患病的框镜鲤出现肛门红肿、体表出现局部红点等症状；罗非鱼【7】，患病的罗非鱼出现肠道肿大、有积液、肌肉轻微出血等症状；中华鳖【8】，患病的中华鳖出现行动迟缓、反应迟钝及胃、肠壁出血等症状。本试验从某发病鲫鱼的病变的组织中无菌取出一株细菌，该病鱼的主要症状为呈现行动怠惰，游动缓慢，长独处水面，不久便死去，体表出现大面积鳞片脱落，和体表局部溃疡，并出现鳍基充血等症状。所以我们根据以上症状，合理推测鲫鱼心脏中的即为文隆气单胞菌（A.veronii）。另外，此菌渐已成为重要的人--鱼共患致病菌【9】，可以导致人体腹泻、肺炎和伤口感染【10】，还能引起自身的肠胃炎【11】。文隆气单胞菌（A.veronii）广泛分布在污泥，水体、食物和动物机体中，其和豚鼠气单胞菌、嗜水气单胞菌及温和气单胞菌是多种水产动物重要的病原菌【12】。