近年来,人们对深部真菌病方面的研究有一定的进展,但是由于其感染率逐年上升,病原真菌对传统药物的耐药性增强,交叉耐药又造成耐药率进一步上升,还有药物的毒副作用等,寻找并开发高效低毒的抗真菌药物显得尤为重要。天然药物具有副作用小,较少出现耐药等特点,而且,我国药用植物资源丰富,故开发研究抗真菌天然药物具有广阔前景。国内外研究人员经过几十年的努力,至今已发现300余种具有抗真菌活性的药用植物[6]。
挥发油(volatile oils),又称精油(essential oils),为植物的次生代谢产物之一,是一类具有芳香气的油状液体。可从植物的花、叶、果实、种子中提取,在常温下可蒸发,可随蒸汽蒸馏又不溶于水。在植物界分布很广,主要分布于芳香植物中,存在于植物的腺毛、油室、油管、分泌细胞或树脂管道中,部分具有抗菌活性[7]。目前,大约有3000种挥发油从植物中提取出来,其中有300多种已开发成产品[8]。植物挥发油的主要成分可分为萜烯类化合物、芳香族化合物、小分子化合物和脂肪族化合物这几类,有研究表明橙花醇对白色念珠菌具有很强抑制作用[9],但是没有进行深入的研究,而本研究将检测其对白色念珠菌细胞周期和细胞凋亡的影响,进一步阐明橙花醇抗白色念珠菌的作用机制。
橙花醇{顺-3,7-二甲基-2,6-辛二烯-1-醇(Nerol)},无色油状液体,带有令人愉悦的近似新鲜玫瑰和苹果的香甜气,微带清新怡人的柠檬样的果香,香气平和典雅,柔和优美,又相对偏清。是贵重的香料和医药中间体[10],在食品、日化香精的调配中被普遍使用,同时也是合成另一些重要香料的中间品,而且是合成这些重要香料的关键原料。在香精、医药等行业中具有广泛的应用价值。天然橙花醇主要存在于橙叶、橙花、甜橙、玫瑰、斯里兰卡香茅和柠檬等中[11]。因带有新鲜的玫瑰清香和柑橘香调,主要用来配制草莓、柑橘等水果香精,也常用于营造悬钩子-草莓香的效应。除了可以作为食用香料外,橙花醇还广泛用于香精的调配,是配制橙花、玫瑰、玉兰等香精的主要香料,常用于调制多种香水和各种花香型化妆香精,也可制成酯类香料。橙花醇在美国食品香料和萃取物制造者协会(FEMA)的FEMA编号为2770[12];作为食用香料,橙花醇在2003年被食品添加剂联合专家委员会(JECFA)评价为安全的,其JECFA 编号是1224[11];同时,我国食品添加剂使用标准(GB 2760—2011)也允许使用橙花醇作为食品香料,其编号是S0046[13]。橙花醇可以从天然植物中提取得到,也可通过化学方法合成。通过使用还原剂对柠檬醛进行选择性还原可直接制备橙花醇和香叶醇的混合物,且柠檬醛廉价易得[14],因此,橙花醇来源丰富。然而,针对橙花醇的抗真菌机制鲜有报道。
细胞周期(cell cycle)指细胞从一次分裂完成到下一次分裂完成所经历的全过程和顺序变化,分为间期和分裂期两个阶段[15]。间期为准备阶段,包括G1、S 和G2期。G1期又称合成前期,此期间主要合成RNA和蛋白质,为下一阶段S期的DNA复制做好物质和能量基础。S期即DNA合成期,同时合成组蛋白和DNA复制所需要的酶。G2期即DNA合成后期,DNA合成终止,合成大量的RNA及蛋白质,包括微管蛋白和促成熟因子等,是有丝分裂的准备期。分裂期分为前期、中期、后期和末期,是一个连续变化的过程。在细胞周期中,大部分时间处于间期。在细胞繁殖过程中,一般情况下,前一周期的结束即为下一周期的开始,但是有的细胞脱离细胞周期暂时停止分裂,在一定的适宜的刺激下又可以进入周期的称为G0期。
将流式细胞术应用于细胞周期的检测,其原理是根据细胞周期中,DNA含量的周期性变化,间期时,首先合成DNA进入S期,DNA合成后进入G2 期和M期。用染料将DNA染色,在激光激发下,染料发出荧光,通过荧光探针可进行相对DNA含量的测定、分析等。
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