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    （8）加40-100µlTE缓冲液或灭菌的双蒸水溶解DNA。
    （9）    测DNA浓度。
    1．3．2  分子定位与基因定位
    选择均匀分布于12条染色体上的135对SSR和Indel标记，在yl1/窄叶青8号F2群体中选出10株黄叶个体，与两个亲本一同进行PCR扩增及聚丙烯酰胺凝胶电泳检测，找出与黄叶表型基因连锁的标记，通过标记的筛选可将目标基因定位于某条染色体上，再用该连锁标记及其附近的标记对F2中的黄叶个体进行连锁验证，从而将目标基因确定在比较具体的某一区间上。
    1．3．2．1  PCR反应
    （1）PCR反应体系（25µl）
    cDNA（10ng/µl）    2.0µl
    Primer （2pmol/µl）    1.0µl
    10×Bufferfree （MgCl2）
    dNTP（2.5mM）MgCl2 （25mM）   
    11µl
    Taq （5u/µl）    0.25µl
    ddH2O    11µl
    总体积    25µl
    （2）PCR反应程序
    PCR反应参考Chen等的方法[7] ，略作改动。
    step1    95℃    5min
    step2    95℃     30sec
    step3    55℃     30sec
    step4    72℃    30sec
    step5    go to step2    34cycles
    step6    72℃    5min
    step7    10℃    保存
    1．3．2．2  PCR产物的检测
    （1）    聚丙烯酰胺凝胶电泳
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