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3.3.2 悬浮细胞的生长动态 23
3.3.3 pH对细胞悬浮培养的影响 23
4 结论 25
参考文献 26
致谢 28
1 前言
小蔓长春花多产于欧洲地区，其他地区的气候、环境等条件大多不适合其生长。小蔓长春花所含成分长春胺，具有很高药用价值，被广泛应用于医药领域。已有研究表明小蔓长春花种生物碱成分——长春胺对缺血性心血管疾病的治疗尤其有效，临床上已经有所应用。此外，在提高记忆力、治疗痴呆等方面也有一定的治疗作用。因此，市场对于小蔓长春花的需求在不断增大，作为补充资源的一种可行性方法，细胞悬浮培养成为了提取长春胺主要手法[1]。
由于小蔓长春花生长条件需求复杂，多产于欧洲，自然条件以及生长环境的恶劣，导致小蔓长春花繁殖困难，自身繁殖系数很低[2]。现今社会对于土地的开垦和利用导致自然环境的破坏，不适合小蔓长春花的生长，导致小蔓长春花资源匮乏[3]。小蔓长春花在医学上通常是以全草入药的，其大部分自然分布在欧洲的东南部、中部和中亚地区，我国于20世纪70年代开始进行从欧洲引入小蔓长春花的行动，并且之后我国先后在北京、浙江温州、山东潍坊等地方选出合适的环境来进行小蔓长春花的引种，并且其引种在一定程度上取得了成功[4]。对于小蔓长春花中的有效成分长春胺而言，人工合成比较繁琐，而且要想得到大量的长春胺，人工合成耗时耗力，因此，解决这一问题的理想途径之一就是植物细胞培养[5]。
本课题研究的主要目的是通过选取小蔓长春花嫩叶和茎段为材料，对小蔓长春花愈伤组织诱导和细胞悬浮培养进行研究，并对悬浮细胞生长特性进行观察，旨在找出较为适合小蔓长春花细胞悬浮培养的培养基配方，目的在于摸索出较优化的细胞悬浮体系的条件，为小蔓长春花细胞悬浮培养的深入研究奠定基础进一步进行细胞悬浮培养，得到稳定的悬浮细胞系，满足市场对其不断增大的需求，也能为接下来小蔓长春花的细胞研究奠定良好的基础。
1.1 小蔓长春花的研究现状
1.1.1 化学成分的研究
小蔓长春花(Vinca minor L.)的俗名又叫做缠绕长春花、蔓长春花、长春蔓，茎蔓细长匍匐偃卧，它接触到土壤的茎节会产生不定根；叶对生，长圆至卵圆形蒿荚果，它的种子通常呈现为黑褐色的状态，是夹竹桃科(Apocynaceae)蔓长春花属(Vinca L．)的多年的生藤本植物，小蔓长春花通常是以全草作为药用成分入药使用的，小蔓长春花的分布地理位置通常是在欧洲的东南部、中部和中亚地区。药用生物碱长春胺(vincamine)是小蔓长春花中的药用成分中的一种主要的具有很大药用价值的生物碱，它是单萜吲哚生物碱中的白坚木碱类，它的化学名称为(3a，14β，13a，16a)-14，15-二氢-14-羟基象牙烯宁-14-羧酸甲酯，其外观形状为白色的粉末状，在酸性溶液可以溶解较好[6]。在1953年之际，国外Sehlittle和Furlenmeier两位化学家从小蔓长春花中比较成功地分离出了药用价值很高的生物碱成分长春胺。之后到了1962年，Trojanek，Mokry，Clauder等人又在经过一系列研究后确定了它的化学结构。751年之后的1968年，Trojanek，Blaha等人又陆续在实验研究中得出了了长春胺的空间构型。纯天然提取的长春胺的化学结构呈现右旋体形态，而用化学方法进行人工合成的长春胺是消旋体的结构，两者有着明显结构上的差别[6]。长春胺药用价值极其高，近年来的研究更是不间断，长春胺在一定的程度上拥有对脑循环进行适当调节的作用、对神经的动态平衡进行基本文持、对神经有着保护的作用，并且还有一定的抗氧化等作用。