1 材料与方法
1.1实验材料:
本研究于2016年,在江苏境内选取三个实验地点,分别是苏北的泗阳、苏中的金坛、苏南的如皋,设置双因子裂区试验。主区为耕作方式,包括两个水平:旋耕 (RT) 和翻耕 (PT);裂区为秸秆还田方式,包括两个水平:秸秆全量还田与秸秆移除。其中如皋地区仅采用旋耕耕作的单因子秸秆还田耕作方式即如皋RNRT-如皋RRT,其他两个地区均采用双因子裂区试验:金坛JNRT-金坛JRT、金坛JNPT-金坛JPT、泗阳SNRT-SRT、泗阳SNPT-SPT(每个处理共有三个重复)。各地区各处理田区的植株施肥量、中耕除草、水量管理、培土等田间管理措施均保持一致。
1.2实验方法:
1.2.1 土壤样品的采集:
在水稻收获之前,于2016年11月3、4、5日,前往如皋、金坛、泗阳的田间实验地点采用五点取样法,在每个小区的15cm深处土采集土壤样品,采集完装入密封袋(共计30个样),然后立即运回实验室。再弃去土样中的杂根,用20目的筛板均匀筛土之后放于4℃恒温冰箱保存,留置后期室内实验处理分析。
1.2.2 土样接种实验处理:
首先将Biolog Ecoplate 从4℃冰箱内取出,然后预热至25 ℃留存。其次,称取5g新鲜土样加入到已装有45mL灭菌生理盐水并放入盛有玻璃珠(0.85%)的150 mL三角瓶中, 在摇床上振荡30min(摇床设置:28℃-250r/min),静置片刻,浸提土壤菌悬液用无菌生理盐水稀释至10-3倍(三角瓶中为10-1,再取1ml10-1加入到盛有9ml无菌生理盐水的试管中摇匀即得10-2,1ml10-2加入到盛有9ml无菌生理盐水的土样槽中摇匀即得10-3),吸取125μL的10-3稀释液至Biolog ECO板的微孔中,后将接种好的板放置在25 ℃的恒温培养箱中避光培养168h(7天),每隔24 h在Biolog测试读数仪上读取590 nm波长的吸光度(共计读数8次)。
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