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摘要：目的：本文对温度和实验方法对增强绿色荧光蛋白（enhanced Green Fluorescent Protein，EGFP）在大肠杆菌中的影响因素进行初步的研究。分别在24℃和37℃下进行三种方式的诱导表达培养，在表达培养进入平台期后用荧光分光光度计检测荧光强度来测定表达的正确折叠的蛋白质水平。 结果表明接种方法和培养温度存在明显的相互作用：24℃下150μL的接种方法比接种环接种更好；37℃下则一环接种的方法最好，其次是单菌落的接种方法，150μL的接种方法是差。150μL的接种方法24℃比37℃好，一环接种方法37℃比24℃好。总的来说最佳处理的接种和培养条件是一环接种37℃培养。29141
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毕业论文关键词：绿色荧光蛋白 诱导表达 荧光强度 温度 接种方法
Factors influencing the EGFP expression in E. coli
Abstract：The present study investigated the influencing factors of EGFP（enhanced Green Fluorescent Protein) expression in E. coli by culturing at 24 ℃ and 37 ℃ and with three inoculation methods and measuring correct folding protein with fluorescence spectrometer. The results showed that inoculation method and culturing temperature interacted obviously: 150 μL inoculation method was better than one-ring inoculation at 24 ℃. But at 37 ℃ one-ring inoculation method was the best followed single colony inoculation, and 150 μL inoculation method was poor. 150 μL inoculation method was better at 24 ℃ than at 37 ℃, one-ring inoculation method was better at 37 ℃ than at 24 ℃. Temporarily, the best method seems one-ring inculation and culturing at 37 ℃.
Key words: Enhanced Green Fluorescent Protein; inducible expression; fluorescence brightness;
inoculation method.
目 录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1 材料与方法 2
1.1 材料 3
1.1.1 实验材料 3
1.1.2 仪器设备 3
1.1.3 试剂及溶液 3
1.2 方法 3
1.2.1 荧光蛋白质表达克隆的构建 3
1.2.2感受态细胞的转化 4
1.2.2二个培养温度，三种诱导表达培养方法 4
1.2.3 诱导培养后跟踪生长和表达情况 5
1.2.4 提取荧光蛋白 5
2 结果与分析 5
2.1 单点荧光强度测定： 6
2.2 发射波扫描调整： 7
2.3 不同接种方式和培养温度对荧光蛋白质表达的影响
3 讨论 8
致谢 10
参考文献 10
影响EGFP在大肠杆菌表达的影响因素初步研究
引言：以爱一
基因标记技术是近些年来迅速发展的分子生物学技术。伴随着分子生物学和基因工程技术的迅猛发展与广泛的应用，有关基因标记技术的相关研究方兴未艾。荧光蛋白在蛋白质标记基因方面由于其独特的优点，吸引了众多科学家的高度关注，如今已被普遍应用于分子生物学研究的各个方面。荧光蛋白是海洋生物（如水母）体内的一类发光蛋白，大体分为绿色荧光蛋白、蓝色荧光蛋白、黄色荧光蛋白和红色荧光蛋白[1]。
2008 年10 月8 日，绿色荧光蛋白的发现者和推广者日裔科学家下村修(Osamu Shimomura)、美国科学家马丁•查尔菲(Martin Chalfie)以及华裔科学家钱永健(Roger Tsien)[2]被瑞典皇家科学院授予了这年的诺贝尔化学奖。其中的村修于1962 年分离纯化了水母中发光蛋白水母素，发现了一种新的绿色的荧光蛋白。并在之后的8 年时间里，他们分离得到了这个蛋白，当时称绿色蛋白，以后称绿色荧光蛋白(GFP)[3] 。