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ProB3下游引物（ProB3-R）：5' TTTTTTTTCTTCCTTGGCGTG 3'
ProA4上游短引物（ProA4_short_F）：5' TGTGTGTGTGGCTGAAACCG 3'
ProB3上游短引物（ProB3_short_F）：5' ACTGTTTCATCTGCCCCCC 3'
pGWB3下游短引物（GUS_R）：5' TGCCGTAATGAGTGACCGC 3'
1．2．2．2 扩增启动子片段
利用这两对引物从野生型日本晴基因组中进行 PCR 扩增 ProA4和ProB3 片段，PCR条件如下（反应体系50μl）：
5×Buffer 10μl
dNTP 4μl
F引物 1μl
R引物 1μl
Template 1μl
GXL酶 1μl
DdH2O 32μl
总计 50μl
PCR仪参数设置：预变性 98℃ 1min；98℃ 10sec，60℃ 15sec，68℃ 1min/kb，35个循环；后延伸 68℃ 7min。
之后对PCR扩增产物进行跑胶验证，其中ProA4长度为2126 bp，ProB3长度为2254 bp。对验证成功的片段进行切胶回收。