试剂:无水乙醇、95%乙醇、亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠、无水碳酸钠、浓盐酸、邻二氮菲、30%过氧化氢、FeSO4·7H2O、氢氧化钠、磷酸二氢钾、甲醇(色谱纯)、DPPH(1,1-二苯-2-苦肼基,C18H12N15O6)均为分析纯;芦丁、没食子酸、焦性没食子酸(邻苯三酚,C6H6O3)(天津市巴斯夫化工有限公司)、三羟甲基氨基甲烷、Folin-Phenol试剂(上海荔达生物科技有限公司)、Tris-HCl缓冲溶液、磷酸缓冲溶液。
2.2 原料的提取
将向日葵盘清洗干净,经粉碎机粉碎后冷冻干燥48h,称取样品100g,用乙酸乙酯和丙酮依次提取后的残渣中,依照钱玲玲使用的方法和条件[13],继续用适量乙醇和水分别提取30分钟。分别将提取液抽滤干净,滤液置于旋转蒸发仪中蒸发浓缩至适量,乙醇提取的浓缩物用乙醇定容于50mL溶液瓶,水提取物的浓缩物用乙醇定容于100mL容量瓶中,作为待测样品,相当于原材料2.00g/mL。
2.3 提取物成分分析方法源]自=751-·论~文"网·www.751com.cn/
2.3.1 液相色谱分析[14]
条件:水:碳色谱柱C18柱,温度25℃、流速0.5μl/min、进样量3.000ul、流动相比:乙腈/0.1%磷酸=1:99,波长203nm(采用紫外分光光度计确定最大吸收波长)。
乙醇:碳色谱柱C18柱,温度25℃、流速0.5ul/min、进样量3.000ul、流动相比:乙腈/0.1%磷酸=11:89,波长211nm(采用紫外分光光度计确定最大吸收波长)。
2.3.2 气质联用技术[15]
条件:色谱柱:RTX-1MS(30m×0.25mm,0.25μm);柱温:50℃;升温速度:以5℃/min升至280℃保持25min;进样口温度:280℃;进样方式:不分馏;柱流量:1.27ml/min。
离子源EI:电子能量70eV;离子源温度:200℃;接口温度:200℃;检测器电压:0.9KV;扫描方式:Scan;扫描质量范围:35-1000;进样量:1μL。
2.3.3 提取物化学组成分析
在色谱工作站GCMS Postrun Analysis化学工作站,检索NIST02谱图库,对向日葵乙醇和水的提取液进行分析鉴定,采用峰面积归一法检测出组分的相对百分含量,确定其化学组组成。
2.4 黄酮的测试[5]
2.4.1 溶液配制
芦丁标准液:精确称取0.0120g芦丁标准溶液,并用30%乙醇溶解,用100mL容量瓶定容,获得浓度0.12mg/mL芦丁标准液。
NaNO2溶液:称量0.5020g NaNO2到10 mL容量瓶,并用去离子水定容,获得5%NaNO2溶液。
Al(NO3)3溶液:称量1.0250 g Al(NO3)3到10 mL容量瓶,并用去离子水定容,获得10% Al(NO3)3溶液。
NaOH溶液:称量2.0 g NaOH到50 mL容量瓶,并用去离子水定容,获得4%NaOH溶液。