金纳米粒子检测粘多糖初步探索

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摘要-Ⅰ

Abstract--Ⅱ

目录-Ⅲ

图清单-Ⅳ

表清单-Ⅳ

1前言--1

2实验部分--1

2.1仪器与试剂-1

2.2所需溶液的配制2

2.3金颗粒的制备与优化2

2.4配体交换3

2.5透析-3

2.6蛋白的固定-3

2.7肝素的测定-3

3结果与讨论--3

3.1实验原理3

3.2合成金颗粒的表征4

3.3转速和时间对金颗粒纯化的影响6

3.4金颗粒透析后的表征6

3.5肝素的测定6

4结论--6

参考文献--9

致谢-11
1 前言肝素(heparin, Hep)为糖胺聚糖，是粘多糖的一种[1]。由于肝素具有特殊亲和力，与细胞粘附、识别、迁移以及调节各种酶的活性有关，因此在各种生物信号的调节过程中有重要作用。在临床应用中具有重要的作用，需要进行监控[1,2]。通常测量肝素的方法主要是生物学方法和化学方法[3]。由于生物学方法受个体影响较大，因此其应用并不是很广泛[3,4，5]。化学方法主要包括分光光度法[6]、荧光法、电化学分析法、毛管区带电泳法、高效液相色谱(HPLC)法及光散射法[7,8， 9， 10]等。分光光度法敏度不高，荧光法容易产生光漂白问题，电化学方法则易受到溶液中氧的干扰，而毛细管电泳法和 HPLC 法需要贵重的仪器，操作不方便，光散射法主要是染料与肝素作用生成大颗粒复合物，使光散射信号增强[11,12,13,14,15，16]，不要昂贵的仪器，简单，快速，灵敏性高。目前研究表明，可以利用金纳米棒聚集测定微量肝素[2]。在溶液中，金纳米棒呈分散状态，具有微弱的等离子共振光散射信号[13]。但当其与肝素经过静电作用后产生明显的聚集，产生显著的增强 LSPR 信号，信号的增强程度与肝素浓度在一定范围内呈线性关系，由此建立了基于金纳米棒聚集测定微量肝素的等离子共振光散射分析法[17，18，19];此外，可以利用金纳米簇荧光的猝灭与恢复，当金纳米簇的荧光发生猝灭，向该溶液中继续加入肝素钠，荧光恢复。因此发展了一种基于由鱼精蛋白调节的 11-巯基十一烷酸包裹的金纳米簇，用于检测肝素钠的荧光生物传感器，改善肝素浓度检测的准确性[20，21]。目前，利用肝素生物特异性，可以用来检测肝素。
研究表明，1 分子肝素会结合 14 至 15 分子的 FGF，利用生物识别反应，肝素加入到由 FGF 修饰的金纳米溶液中，引起金颗粒团聚，从而引起溶液颜色的变化和波长的红移，利用这些现象来进行肝素的检测[22，23，24，25]。2 实验部分2.1 仪器与试剂电子天平（METTLER TOLEDO仪器（上海）有限公司）、TU-1950，紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）、DF-101S 集热式恒温加热磁力搅拌器、电热鼓风干燥箱（上海一恒科学仪器有限公司）、HulaMixer 样品混合器、 79-1 磁力加热搅拌器、酸度计、 IEC.CL31 Multispeed （离心机）（ThermoELECTRON CORPORATION）、超声波清洗器、纯水仪、移液枪、50KD（RC膜）袋子、烧杯（50 mL×6）、量筒（50 mL）、量筒（1000 mL）、离心管（若干个）、源!自`751'文"论/文`网[www.751com.cn称量纸、样品管（5 mL）、样品管（10 mL）、枪头、保鲜膜、封口膜、比色皿、药匙、吹风机、针筒、滤膜、一次性手套。氯金酸（HAuNPs.3H2O)、二水合柠檬酸三钠、HS-PEG-COOH、磷酸氢二钠、EDC、PH=5 5.0 mM 磷酸缓冲溶液、EGF、FGF、肝素(以上药品试剂均冰箱保存)。