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SHSY5Y 细胞是一种衍生于人的神经母细胞瘤细胞系SK2N 2SH的一种特殊的细胞。SHSY5Y 细胞具有神经突样的细胞质突起, 表达儿茶酚胺能神经元特有的酪氨酸羟化酶、多巴胺2B2羟化酶和多巴胺转运体, 这个细胞系被广泛的运用于帕金森的发病机制的研究。本实验通过检测由GDNF诱导的SHSY5Y细胞中的D2受体的表达变化来鉴定是否分化成功为多巴胺能细胞。
实验部分
1、实验试剂
蛋白、蛋白上样缓冲液、SDS-PAGE凝胶、10％过硫酸铵、SDS-PAGE电泳液、转膜液、甲醇、DAB混合液、洗涤液、封闭液、一抗（D2-R）、二抗（山羊抗兔lgG751根酶）、一抗稀释液、二抗稀释液、β-actin，电泳缓冲液、转移缓冲液、洗脱抗体缓冲液、显影液、蛋白Marker、化学发光试剂、酒精。
2、实验仪器
超净工作台；高温高压消毒锅；高速离心机；冰箱；SDS-PAGE电泳设备，包括电泳槽、玻璃板、电泳仪等；转膜仪；摇床；显影的暗室；移液枪；玻璃棒，各种烧杯等，电子天平。
3、实验步骤
3.1、前期工作准备
带上无菌手套，超净操作台开启通风，用75％酒精浸泡过的棉球擦拭，擦拭完毕后开紫外消毒几分钟；移液枪枪头高温高压灭菌；玻璃板与梳子洗净烘干；10% 过硫酸铵溶液的配制：称取0.1 g 过硫酸铵和1 ml蒸馏水，低温保存；SDS-PAGE电泳液的配制：Tris粉末15.1 g，Glycine（甘氨酸）94 g，SDS粉末5.0 g，定容至1 L。本实验全程均要求戴手套。